生化检测方法汇总

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1、一、血清谷丙转氨酶（SGPT）赖氏改良法器材:试管及试管架、移液器或吸量管、恒温水浴锅、721型分光光度计、温度计、动物血清试剂:（1）0.1mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液：①0.1mol/L磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO414.22g或Na2HPO4·2H2O17.8g溶解于蒸馏水中，并稀释至1000ml,4℃保存。②0.1mol/L磷酸二氢钾溶液：称KH2PO413.61g溶解dH2O中，稀释至1000ml,4℃保存。③将0.1mol/L磷酸氢二钠溶液420ml和0.1mol/L磷酸二氢钾溶液80ml混和即为0.1mol/LpH7.4的磷酸盐缓冲液。加氯仿数滴，4℃

2、保存。（2）标准丙酮酸（含丙酮酸2.0μmol/mL）：取标准丙酮酸钠10mg，用上述缓冲液准确定容为50mL。此液须当日用当日配。（3）SGPT底物液(含α-酮戊二酸2μmol/ml及DL-丙氨酸200μmol/ml):取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸7g,用试剂1溶成100ml，在稀释到刻度前，以1mol/LNaOH调pH7.4（因为转氨酶在pH7.3以下或7.6以上的环境中酶活性下降），加数滴氯仿防腐。此液于冰箱保存可使用4天。（4）GOT底物液(DL–天冬氨酸200mmol/L,α-酮戊二酸2mmol/L):称取α-酮戊二酸29.2mg和DL-门冬氨酸2.6

3、6g置于一小烧杯中,加入1mol/L氢氧化钠20.5ml使溶解,并校正pH至7.4,然后将溶液移入100ml容量瓶内,用0.1mol/L磷酸盐缓冲液定容至刻度。放置冰箱内保存。（5）2.4-二硝基苯肼溶液:取分析纯2,4-二硝基苯肼19.8mg，用1mol/LHCl溶于100ml，置棕色瓶中保存。（6）0.4mol/LNaOH溶液:称取16g固体NaOH，用蒸馏水溶解，冷却至室温，定容至1000mL，备用。操作步骤：1、标准曲线绘制：取试管18支按下表操作。试管号对照12345丙酮酸标准液（1毫升2微克分子）00.050.100.150.200.25SGPT或SGOT底物0

4、.500.450.400.350.300.250.1M磷酸盐缓冲液PH7.40.10.10.10.10.10.1相当于谷丙转氨酶单位0285797150200相当于谷草转氨酶单位02461114190—每个样做3个平行，置37水浴30分钟，各管加2，4-二硝基苯肼液0.5mL，混匀，再在37℃水浴中放置20mL，各管加0.4mol/L氢氧化钠溶液5mL，混匀，10分钟后，从水浴箱中取出，以蒸馏水调“零”点，用520nm波长比色，读取各管之吸光值，各管之吸光值均减去空白的吸光值，然后以吸光值为纵坐标，各管相应的转氨酶单位为横坐标。绘制成标准曲线。为了方便，可列出各光度相当于转

5、氨酶单位表。2、酶活性测定：取试管两支，注明测定管及对照管。试剂样品测定（每个样3个平行）对照（每个样3个平行）血清（mL）0.10.1SGPT或SGOT底物（mL）0.5—置37℃水浴30分钟（SGOT为37℃，60分钟后再加枸橼酸苯胺1滴）2.4-二硝基苯肼（mL）0.50.5置37℃水浴20分钟SGPT或SGOT底物（mL）—0.5NaOH溶液（mL）5.05.0对照及样品各做3个平行，充分摇匀，静置10分钟后，用520nm波长比色，以蒸馏水调节零点，读取吸光值，用样品减去对照吸光值，求得样品的谷丙转氨酶活力。l谷丙转氨酶活性单位：37℃，pH7.4，每小时每毫升血清

6、催化生成1μmol丙酮酸为1个单位。例：0.1ml血清每小时催化生成0.1μmol丙酮酸,即相当于GPT100U/100ml血清。l注意：1.在测定SGPT时，应事先将底物、血清在37℃水浴中保温，然后在血清管中加入底物，准确记时。2.标准曲线上数值在20~500U是准确可靠的，超过500U时，需将样品稀释。3.转氨酶只能作用于α－L－氨基酸，对D－氨基酸无作用。实验室多用α－DL－氨基酸（较L－氨基酸价廉），若用L－氨基酸，则用量减半。4.溶血标本不宜使用，因血细胞中转氨酶活力较高，会影响测定效果。5.血清样品的测定需在显色后30分钟内完成。6.丙酮酸标准液的浓度要求十分

7、精确。由于丙酮酸开封后易变质为多聚丙酮酸，而影响丙酮酸标准液的有效浓度而不易察觉。建议使用质量可靠的市售丙酮酸标准液。7.每批试剂的空白管吸光度上下波动不应超过0.015A，若有超出，应仔细检查试剂与仪器方面的问题。8.严重脂血、黄疸、溶血和糖尿病酮症酸中毒病人血清标本可增加测定的吸光度，测定这类标本应做血清标本对照管优点：尽管基质液中余下的a-酮戊二酸同样可生成红棕色苯腙硝醌化合物而影响测定结果,但因其量不多,加之对505nm的吸光度远不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物强,尤其用标准曲线作测定时,所用的酶活性单位通过