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《人参皂苷rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响论文.freelol/L)神经球数明显增加。选定人参皂苷Rg140、4、0.4μmol/L作为高、中、低剂量进行进一步实验研究,与对照组相比,人参皂苷Rg1高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加。结论人参皂苷Rg1可以明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用。【关键词】人参皂苷Rg1;胚胎神经干细胞;增殖Abstract：ObjectiveToexploretheeffectofginsenosideRg1onproliferationofneurals
2、temcells(NSCs)invitro.MethodsTheNSCsculturesthebrainofembryonicday16SDrat.PrimitiveNSCsmunocytochemical(ICC)stainingofNestin.TheICCstainingofBrdUiteddilutionmethod,theeffectofginsenosideRg1ontheproliferationofNSCsol/L)ofginsenosideRg1couldpromotetheproliferationofN
3、SCsinvitro.paredbersofnerurospheresofthethreedosageginsenosideRg1groups(40,4,0.4μmol/L)otetheproliferationofNSCsinvitro.Keybryonicneuralstemcells;proliferation神经干细胞(neuralstemcell,NSCs)具有自我更新能力和多向分化潜能1,在神经系统疾病或损伤的修复中起着重要的作用。研究调节NSCs增殖分化的影响因素,诱导其增殖和定向分化为中枢神经系统损伤修复和退
4、行性变的治疗带来了希望。因此,NSCs的体外培养、增殖、诱导定向分化的研究已成为神经科学的一个研究热点。本研究对体外培养胎鼠NSCs进行增殖鉴定,观察了人参皂苷Rg1对NSCs增殖能力的影响,为开发对NSCs具有保护效能的治疗药物、探索神经系统疾病新的治疗方法打下基础。1材料与方法1.1培养基、试剂及药物DMEM/F12(1∶1)培养基(Lot.NoATB31223,HYCLONE,U.S.A);HBSS液(无钙离子和镁离子,Lot.No01118197,LONZA,U.S.A);B27添加物(Lot.No311624,GI
5、BCO/INVITROGEN);青霉素-链霉素溶液(双抗,100×)(每毫升含有10000U青霉素以及10mg链霉素,Cat.NoP4333,SIGMA);重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF,Cat.NoCYT-218,PROSPEC-TANY,ISRAEL);人表皮生长因子(EGF)(Lot.No3860501000,STRATHMANNBIOTEC,GERMANY);人参皂苷Rg1、丹酚酸B(天津中一制药)。1.2大鼠胎鼠神经干细胞原代培养及传代取孕龄16天孕鼠,脱臼处死,75%乙醇浸泡消毒3～5min,无菌条件下打
6、开腹腔,取出串珠状子宫,浸泡于冷HBSS液中。取出胎鼠,置于另一含有冷HBSS液的培养皿内,小心剥离外层骨膜,取出大脑皮质并去除软脑膜,冷HBSS液漂洗2次后,转移至离心管。加入一定量冷HBSS液后吹打至肉眼看不到明显组织块,使液体呈均匀悬浊状。过200目(70μm)筛网,1000r/min离心8min,弃上清,全培基(含2%B27、20μg/LbFGF、20μg/LEGF的DMEM/F12,1%双抗)重悬,约3～4个胎鼠/75cm2的密度种入培养瓶中,37℃、5%CO2培养箱中培养。每2～3d半量换液,收集培养液到50mL
7、离心管中,静置3～5min,然后收集上清(管底约留1～2mL)转入另一离心管,500r/min离心3min。弃约一半上清液,补充入相同量的新鲜的全培基(含1%双抗,2%B27、20μg/LbFGF、20μg/LEGF的DMEM/F12),重悬种置。约5～9d传代1次。500r/min离心3min,收集培养的神经球,沉淀细胞用1mL全培基重悬,用23号(内径0.65mm)注射器轻轻吹打5次,避免产生气泡,静置3～5min使未吹散的细胞沉底。收集上清,管底的细胞再加1mL继续吹打5～8次,收集细胞补加全培基,以1×105个/mL
8、的密度全培基重悬种入培养瓶或培养板。1.3神经干细胞及增殖鉴定采用ABC法进行Nestin免疫组化染色鉴定NSCs。染色步骤：盖玻片放入6孔板内,每孔加多聚赖氨酸处理60min;将细胞悬液接种于多聚赖氨酸处理过的盖玻片的6孔板内,贴壁生长2h;4%多聚甲醛固定20min;3%H2O237℃
