人参二醇组皂苷及人参皂苷rb1对体外培养黑色素细胞的影响论文

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1、人参二醇组皂苷及人参皂苷Rb1对体外培养黑色素细胞的影响论文程基焱，钟桂书，韩艺，余鸿【关键词】人参二醇组皂苷；,,.freelechanismofPanaxadiolsaponinsandGinsenosideRb1oncultivationmelanocytesandmelaninsynthesisinvitro.Methods①Cultureandpassagethemelanocytesinvitro；interferethemelanocyteseasuretheOD；②Displaythechangeofe

2、xpressionofnitricoxidesynthaseinthemelanocytesmunohistochemistry.ResultsTheODhadnosignificantdifferencebetentgroupofPanaxadiolsaponinsorGinsenosideRb1（P0.05），theexpressionofnitricoxidesynthasehadsignificantdifferencebetentgroupofPanaxadiolsaponinsorGinsenosideRb

3、1（P0.05）.ConclusionThePanaxadiolsaponinsandGinsenosideRb1cannotaffectthegroelanocytes,butcaninhibittheexpressionofnitricoxidesynthaseinmelanocytes.Keyelanocyte）相关的黄褐斑、雀斑、黑变病、妊娠斑、白癜风、白化病等疾病，美容学上黑色素（melanin）对皮肤的颜色的决定作用，都是目前医学界的一个热门话题。因此，对黑色素细胞的研究必然会对美容学和皮肤病学产生重要的影

4、响。信使分子一氧化氮(nitricoxide；NO)是由一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase；NOS)催化产生，文献报道表明［1，2］NO供体可以促进黑色素合成增加以及酪氨酸酶的活性增强，提示NO是黑色素合成的强效激活因子。所以NOS的表达可以反应黑色素细胞的功能状态。人参具有保护机体细胞和全身免受应激的影响，降低血糖和血胆固醇，促进新陈代谢等功能，目前已经广泛应用于临床的许多方面，包括在很多皮肤保健品和化妆品内［3，4］。本研究观察用人参的有效成分―人参二醇组皂苷(Panaxadiolsaponins

5、；PDS)、人参皂苷Rb1（GinsenosideRb1）对培养黑色素细胞及细胞NOS表达的影响，目的在于阐明人参对黑色素细胞及黑色素合成的调节作用及机理，为临床应用提供实验依据。1材料与方法1.1材料人参二醇组皂苷和人参皂苷Rb1；黑色素细胞株；NOS免疫组化试剂盒；1640培养基；MTT试剂；二甲亚砜；小牛血清；CO2恒温培养箱；无菌操作台；带数码相机XSJD倒置相差显微镜；细胞培养瓶、培养孔板；平板震摇仪；等。1.2方法与结果细胞培养和传代：细胞株复苏后，加1640培养基稀释至3×105/ml，转种于培养瓶培养。

6、细胞以3×105/ml常规传代，倒置相差显微镜下动态观察，根据细胞生长状况和培养基颜色变化及时更换培养基或传代。实验分组与处理方法：用MTT法测定培养细胞的数量变化，以确定黑色素细胞的最佳生长时间为72h。将细胞稀释成3×105/ml，接种于可拆卸式96孔板，每组12孔，每孔200μl。参照文献采用不同浓度人参二醇组皂苷和人参皂苷Rb1进行干扰并分组：对照组（正常1640培养基，controlgroup；CG）；人参二醇组皂苷实验组（PDStreatmentgroup；按浓度10，20，50μg/ml分为PG1、PG2

7、、PG3）；人参皂苷Rb1实验组（GinsenosideRb1treatmentgroup；按浓度10，20，50μg/ml分为RG1，RG2，RG3）。培养72h后每孔加入MTT(5mg/ml)20μl，继续培养5h后，吸弃上清液，每孔加入DMSO200μl，平板震摇仪上震摇10min，测OD值(波长490nm)。免疫组织化学实验：参照文献，用SABC法显示各组NOS［5］。图象分析采用盲法进行。用IS4400图象分析仪，在400倍下进行图象分析，每组随机选取5张切片的25个视野，每个视野2个细胞，由计算机处理系统测

8、定各组黑色素细胞胞质的光密度，结果以+s表示。1.3统计分析OD值及图像分析资料进行单因素方差分析，组间两两比较采用SNKq法；以上统计学均采用SPSS10.0forpus显微镜400倍下观察，黑色素细胞为球形，细胞生长迅速，排列紧密，细胞折光性好。对照组和实验组的细胞密度、细胞形态均无显著差异。2.2实验组各组黑色素细胞OD值与