花椒体内外抗肿瘤作用及其机制的初步研究

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1、花椒体内外抗肿瘤作用及其机制的初步研究袁太宁,王艳林,汪鋆植【摘要】目的研究花椒挥发油体内外抗小鼠H22肝癌细胞作用及其免疫学机制。方法花椒挥发油按不同时间（24，48，72h）及不同浓度（0.5～8mg/ml）分别处理H22细胞，MTS法分析细胞的增殖速度，用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。建立H22荷瘤小鼠模型，观察小鼠肿瘤的生长情况,计算肿瘤生长抑制率；ELISA法检测花椒挥发油处理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性。结果4mg/ml花椒挥发油处理H22细胞72h可显著地抑制H22细胞增殖，1mg/ml花椒挥发油处理H22

2、细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现，且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少，花椒挥发油对小鼠实体瘤生长具有显著抑制作用，但不能提高荷瘤小鼠血清中IL-2和IL-12的水平。结论花椒挥发油可抑制H22细胞增殖并激发细胞凋亡，但不能通过提高机体的免疫功能发挥抗肿瘤作用。【关键词】花椒；H22细胞；凋亡；免疫功能　　Abstract：ObjectiveTostudytheanti-tumereffectanditsimmunologicalmechanismoftheessentialoilofzanthoxyluminvivoan

3、dinvitro.MethodsTreatingH22cellsatdifferenttimeand,MTSetryormodesoreffectofzanthoxylumorgroIL-2andIL-12inedbyELISAassay.ResultsTreatingH22cells72hby4mg/mlessentialoilofzanthoxylumresultedinremarkableinhibitionofthecellproliferation.TreatingH22cells72hby1mg/mlessentialoi

4、lofzanthoxylumresultedinappearanceofsub-G1andincreaseG0/G1phasecellsanddecreaseSphaseandG2/Mphasecells.Theessentialoilofzanthoxyluminhibitedthegroorintumor-bearingmice.HocouldnotincreasethecontentsofmurineserumIL-2andIL-12.ConclusionTheessentialoilofzanthoxyluminhibitsp

5、roliferationandinducescellapoptosisofH22cells,butitcannotexerttheanti-tumorefficiencythroughreinforcingtheimmunefunction.　　Key;H22cells;Apoptosis;Immunefunction　　花椒属一种温热类中草药，辛,热,有小毒，归脾、肾两经,功能温中止痛,解毒杀虫，常用于治疗脾胃虚寒症。花椒还是深受民众喜爱的重要食用性香料，其资源在我国分布很广,安全性高。国内外研究报道花椒对消炎、镇痛、杀菌、抗病毒、

6、抗寄生虫、抗真菌、抗氧化等均具有较强的作用〔1～5〕。随着对花椒提纯和药理作用的深入研究,发现花椒还具有抗肿瘤作用,但目前对花椒抗肿瘤的研究还不够深入,其体内的抗肿瘤作用研究则更少。为了认识花椒在体内外抗肿瘤作用的机制和特点,我们选用小鼠H22肝癌细胞为研究对象,观察了花椒在体内外对该细胞的作用，以期探讨花椒在体内外抗肿瘤作用及其可能的机制。　　1材料　　成熟花椒,采于湖北宜都，经汪鋆植博士鉴定为Zanthoxylumbungeanum。H22腹水型小鼠肝癌细胞由本院保存，清洁级BALB/C小鼠由同济医科大学动物中心提供。MTS细胞增

7、殖分析试剂由Promega公司提供。EPLCSXL流式细胞分析仪为BecmanCoulter公司产品,全波长酶标仪为为Thermo公司产品，R206D旋转蒸发器为上海申生科技有限公司产品。　　2方法　　2.1花椒挥发油制备使用旋转蒸发器提取花椒果皮挥发油并过滤除菌，称取适量挥发油加入5%Tin，用RMPI1640无血清培养基或生理盐水稀释成所需要的浓度。　　2.2细胞增殖分析　将对数生长期的H22细胞以4×107/L细胞数接种于圆底96孔培养板,每孔50μl。37℃培养24h后,向孔内直接加入含不同浓度（8，4，2，1，0.5mg/m

8、l）花椒挥发油的RPMI1640培养基50μl。在加入药物后选定的时间点(24，48，72h),向每孔中加入20μlMTS试剂,37℃继续保温2h显色,于490nm波长下读取OD值。　　细胞生存率（％）=OD药物/OD对