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1、花椒体内外抗肿瘤作用及其机制的初步研究论文袁太宁,王艳林,汪鋆植【摘要】目的研究花椒挥发油体内外抗小鼠H22肝癌细胞作用及其免疫学机制。方法花椒挥发油按不同时间（24，48，72h）及不同浓度（0.5～8mg/ml）分别处理H22细胞，MTS法分析细胞的增殖速度，用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。建立H22荷瘤小鼠模型，观察小鼠肿瘤的生长情况,计算肿瘤生长抑制率；ELISA法检测花椒挥发油处理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性。结果4mg/ml花椒挥发油处理H22细胞72h可显著地抑制H22细胞增殖，1mg/ml花椒挥发油处理H22细胞72h即可导致亚凋亡峰的出
2、现，且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少.freelereffectanditsimmunologicalmechanismoftheessentialoilofzanthoxyluminvivoandinvitro.MethodsTreatingH22cellsatdifferenttimeand,MTSetryormodesoreffectofzanthoxylumorgroIL-2andIL-12inedbyELISAassay.ResultsTreatingH22cells72hby4mg/mlessentialoilofzanthoxylumre
3、sultedinremarkableinhibitionofthecellproliferation.TreatingH22cells72hby1mg/mlessentialoilofzanthoxylumresultedinappearanceofsub-G1andincreaseG0/G1phasecellsanddecreaseSphaseandG2/Mphasecells.Theessentialoilofzanthoxyluminhibitedthegroorintumor-bearingmice.Hocouldnotincreasethecontentso
4、fmurineserumIL-2andIL-12.ConclusionTheessentialoilofzanthoxyluminhibitsproliferationandinducescellapoptosisofH22cells,butitcannotexerttheanti-tumorefficiencythroughreinforcingtheimmunefunction.Key;H22cells;Apoptosis;Immunefunction花椒属一种温热类中草药，辛,热,有小毒，归脾、肾两经,功能温中止痛,解毒杀虫，常用于治疗脾胃虚寒症。花椒还是深受民
5、众喜爱的重要食用性香料，其资源在我国分布很广,.freelbungeanum。H22腹水型小鼠肝癌细胞由本院保存，清洁级BALB/C小鼠由同济医科大学动物中心提供。MTS细胞增殖分析试剂由Promega公司提供。EPLCSXL流式细胞分析仪为BecmanCoulter公司产品,全波长酶标仪为为Thermo公司产品，R206D旋转蒸发器为上海申生科技有限公司产品。2方法2.1花椒挥发油制备使用旋转蒸发器提取花椒果皮挥发油并过滤除菌，称取适量挥发油加入5%Tin，用RMPI1640无血清培养基或生理盐水稀释成所需要的浓度。2.2细胞增殖分析将对数生长期的H22细胞以4×1
6、07/L细胞数接种于圆底96孔培养板,每孔50μl。37℃培养24h后,向孔内直接加入含不同浓度（8，4，2，1，0.5mg/ml）花椒挥发油的RPMI1640培养基50μl。在加入药物后选定的时间点(24，48，72h),向每孔中加入20μlMTS试剂,37℃继续保温2h显色,于490nm波长下读取OD值。细胞生存率（％）=OD药物/OD对照×100％；细胞生长抑制率（％）=(1-细胞生存率)×100%2.3流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期取1×106对照细胞或经不同浓度（8，4，2，1，0.5mg/ml）花椒挥发油处理的细胞,用冰冷PBS洗涤1次后,再悬浮于500
7、μl低渗DNA染色液中(1g/LSodiumCitrate,0.1%TritonX100,100mg/LRNase,50mg/LPropidiumIodode),4℃保温30min后,经流式细胞仪分析凋亡细胞及细胞周期时相分布，计算细胞增殖指数（PI）。PI=（S+G2/M）÷(G1+S+G2/M)×100%2.4花椒挥发油对H22荷瘤小鼠移植瘤生长的影响取对数生长期H22细胞,以RPMI1640调整细胞浓度为5×106/ml,于BALB/c小鼠左侧下腹部行无菌皮下接种0.2ml细胞悬液。接种24h后将BALB/c小鼠随机分为5组,给药剂量分别为10
