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1、磁分离酶联免疫荧光法（MEIF）检测人血清中胰岛素的论文【摘要】 目的:采用磁微粒分离酶联免疫荧光（meif）分析技术建立一种简便、高敏感性、定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法。方法:选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mab)。一株mab用异硫氰酸荧光素（fitc）标记,另一株用碱性磷酸酶(ap)标记;偶联羊抗fitc抗体的磁珠用作固相分离载体,4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物。结果:成功建立了定量检测人血清胰岛素的meif,灵敏度2.0μiu/ml,线形范围0～188.52μiu/ml,批内变异系数(cv)为4.3%～
2、5.2%,批间cv为2.6%～9.5%,稀释回收率为93%～117%,加标回收率为94%～113%。实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较,具有良好的相关性。结论:meif定量测定人insulin方法成本低、灵敏度高、稳定性好,在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景。【关键词】酶联免疫分析免疫荧光4-甲基磷酸伞型酮磁珠胰岛素 establishmentofthemagicseparationenzymeimmunofluorescencemethodfordetectinginsulin
3、 xiejing,liuzhen-shi,hushan,cairu-xiu,yanghai,yangxiang-liang* collegeoflifescienceandtechnology,huazhongscienceandtechnologyuniversity,:toestablishaconvenientandsensitivemagicseparationenzymeimmunofluorescence(meif)methodfordetectinghumaninsulin.methods:tonoclonalantibod
4、ies(mabs)agicsolidphaseseparation.magicbeadsethylumbelliferyl-phosphoricacid(4-mup)elffordetectinginsulin.results:thesensitivityofthisassayl,thelinearrange0μiu/mlto188.52μiu/ml,andtheintra-assayvariationandinter-assayvariationagicenzymechemiluminescenceimmunoassaysystem.co
5、nclusion:themeiffordetectinginsulinislomunedetection. ［keyeimmunoassay;immunofluorescence;4-methylum-belliferyl-phosphoricacid;magicbeads;insulin 糖尿病是我国最常见的内分泌疾病,发病率约为1.3‰,我国每年约有2.7万新增患者。.糖尿病给患者家庭和社会带来巨大的经济损失（每年高达100亿人民币）和沉重的精神伤害［1］。随着人们生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病发病趋于年轻化［2］。血清胰岛
6、素（insulin）含量测定是糖尿病诊断和治疗过程中重要的血清检查项目,对于糖尿病的诊断和治疗具有重要意义。常规检测胰岛素的方法主要有放射免疫法和酶联免疫吸附法等,但存在着放射污染或灵敏度低,操作复杂等不足。本研究旨在建立一种检测人血清胰岛素的新方法-磁分离酶免疫荧光法(magicenzymeimmunofluorescence,meif),实现对人血清胰岛素的定量、敏感和快速检测。 1材料和方法 1.1材料4-甲基磷酸伞型酮（4-mup）购自sigma公司。磁分离试剂、洗液、胰岛素标准品及抗人胰岛素单克隆抗体（mab）fitc和ap连
7、接物由北京倍爱康生物技术有限公司提供。二乙醇胺（dea）和三乙醇胺（tea）购自fluka公司。victorⅲ型荧光检测仪为珀金埃尔默(perkinelmer)公司产品。专用于酶标板的磁分离器为自行研制。恒温箱为上海实验仪器公司产品。白色未标记酶标板为greinermicrolon生产。 1.2方法 1.2.1mab标记物的工作浓度选择将倍爱康公司提供的fitc标记抗人胰岛素mab1和ap标记mab2,用tris缓冲液稀释至不同浓度,以检测灵敏度高、非特异结合低为原则［3］选择标记抗体的最佳工作浓度。 1.2.2探索meif检测人胰岛
8、素的最佳条件通过对ap催化4-mup反应条件的探索、优化;对各种检测条件如标准品、磁分离试剂、荧光底物和标记抗体用量,温育时间等条件进行全面探索后确定检测的最佳条件。 1.2.
