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《磁分离酶联免疫荧光法MEIF检测人血清中胰岛素》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、磁分离酶联免疫荧光法（MEIF）检测人血清中胰岛素作者：谢晶,刘振世,胡珊,蔡汝秀,杨海,杨祥良【摘要】 目的:采用磁微粒分离酶联免疫荧光（MEIF）分析技术建立一种简便、高敏感性、定量检测人血清胰岛素(insulin)的新方法。方法:选用2株识别人胰岛素不同表位的单克隆抗体(mAb)。一株mAb用异硫氰酸荧光素（FITC）标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;偶联羊抗FITC抗体的磁珠用作固相分离载体,4-甲基磷酸伞型酮用作荧光底物。结果:成功建立了定量检测人血清胰岛素的MEIF,灵敏度2.0μIu/mL,线形范围0～188.52μIu/mL,批内变异系数(CV)为4.
2、3%～5.2%,批间CV为2.6%～9.5%,稀释回收率为93%～117%,加标回收率为94%～113%。实际样品的测定结果与倍爱康公司商品化人insulin磁分离发光系统检测试剂盒的检测结果比较,具有良好的相关性。结论:MEIF定量测定人insulin方法成本低、灵敏度高、稳定性好,在临床免疫检测领域具有广阔的应用前景。【关键词】酶联免疫分析免疫荧光4-甲基磷酸伞型酮磁珠胰岛素 ［Abstract］AIM:Toestablishaconvenientandsensitivemagneticseparationenzymeimmunofluorescence(MEIF)1
3、0methodfordetectinghumaninsulin.METHODS:Twomonoclonalantibodies(mAbs)wereconjugatedwithFITCandalkalinephosphatase(AP)respectively,whichwereincorporatedmagneticsolidphaseseparation.Magneticbeadswerecoupledwithsheepanti-FITCantibodyassolidphaseand4-Methylumbelliferyl-phosphoricacid(4-MUP)was
4、usedassubstratetosetupMElFfordetectinginsulin.RESULTS:Thesensitivityofthisassaywas2.0μIu/mL,thelinearrangewasfrom0μIu/mLto188.52μIu/mL,andtheintra-assayvariationandinter-assayvariationwere4.3%-5.2%and2.6%-9.5%,respectively.Therecoveryrateofdilutionwas92.6%-117%andtherecoveryrateofaccession
5、was106%-121%.Theresultoftheassaycorrelatedwellwiththatofmagneticenzymechemiluminescenceimmunoassaysystem.CONCLUSION:TheMEIFfordetectinginsulinislowatcost,sensitive,specificandstable,whichcanbewidelyusedinclinicalimmunedetection. ［Keywords］enzymeimmunoassay;immunofluorescence;4-Methylum-be
6、lliferyl-phosphoricacid;magneticbeads;insulin 糖尿病是我国最常见的内分泌疾病,发病率约为1.3‰10,我国每年约有2.7万新增患者。糖尿病给患者家庭和社会带来巨大的经济损失（每年高达100亿人民币）和沉重的精神伤害［1］。随着人们生活水平的提高和生活方式的改变,糖尿病发病趋于年轻化［2］。血清胰岛素（insulin）含量测定是糖尿病诊断和治疗过程中重要的血清检查项目,对于糖尿病的诊断和治疗具有重要意义。常规检测胰岛素的方法主要有放射免疫法和酶联免疫吸附法等,但存在着放射污染或灵敏度低,操作复杂等不足。本研究旨在建立一种检测人血
7、清胰岛素的新方法-磁分离酶免疫荧光法(magneticenzymeimmunofluorescence,MEIF),实现对人血清胰岛素的定量、敏感和快速检测。 1材料和方法 1.1材料4-甲基磷酸伞型酮（4-MUP）购自Sigma公司。磁分离试剂、洗液、胰岛素标准品及抗人胰岛素单克隆抗体（mAb）FITC和AP连接物由北京倍爱康生物技术有限公司提供。二乙醇胺（DEA）和三乙醇胺（TEA）购自Fluka公司。VictorⅢ型荧光检测仪为珀金埃尔默(PerKinElmer)公司产品。专用于酶标板的磁分离器为自行研制
