吡格列酮对内皮祖细胞增殖、凋亡及功能的影响的论文

《吡格列酮对内皮祖细胞增殖、凋亡及功能的影响的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、吡格列酮对内皮祖细胞增殖、凋亡及功能的影响的论文作者：邸春霞，陆庆明，郭文怡，王海昌，张荣庆，殷忠【摘要】目的：观察不同浓度吡格列酮对大鼠骨髓源性内皮祖细胞（epcs）增殖、凋亡和功能的影响，并探讨其可能的作用机制.方法：正常sd大鼠24只，随机分为a组（对照组）和b,c,d组［吡格列酮组剂量依次为10，20，40mg/（kg·d）］，灌胃处理10d后断颈处死，密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞，经鉴定后证实为epcs.每组细胞培养4d后消化、计数并用完全培养液培养.24h后检测no生成量，3d后检

2、测凋亡情况，7d后检测增殖能力.结果：与a组相比，b,c,d组epcs增殖能力明显增高［b，c，d组a490nm分别为（0.423±0.004）,（0.680±0.008）,（0.443±0.005）vsa组a490nm（0.143±0.006）,p<0.01］；凋亡程度降低［b，c，d组分别为(32.8±0.8)%，(30.9±2.3)%，(33.0±3.9)%vsa组(40.1±1.1)%,p<0.01］；培养上清中no浓度显著提高［b，c，d组分别为（29.2±3.7），（41.

3、0±7.7），（28.7±6.4）μmol/lvsa组（18.9±1.4）,p<0.05］；与c组相比，b组和d组促进epcs增殖能力弱（p<0.01），培养上清中no浓度相对低（p<0.05）.结论：不同浓度吡格列酮均能提高epcs数量和功能；20mg/（kg·d）吡格列酮对epcs的作用较强.【关键词】吡格列酮；内皮祖细胞；糖尿病0引言血管内皮在心血管疾病发病机制中起重要作用，多种心血管疾病都伴有内皮功能障碍.内皮祖细胞(epcs)是血管内皮的前体细胞，在特定应激条件下可分泌

4、促血管生长因子并参与内皮修复和新生血管形成（包括血管新生和血管发生）［1］.研究［2-3］发现，糖尿病患者的epcs增殖能力减退，体外黏附、形成毛细血管的能力也降低.吡格列酮是一种噻唑烷二酮类胰岛素增敏剂，对2型糖尿病有较好的降糖效果和耐受性.研究［4］表明，吡格列酮可以促进epcs介导的新生血管形成，但具体作用机制不明.我们拟探讨体外培养条件下，不同浓度吡格列酮预处理对正常大鼠的骨髓源性epcs增殖、凋亡及功能的变化，为改善内皮损伤提供实验依据.1材料和方法1．1材料雄性sd大鼠24只，体质量7

5、0～80g（第四军医大学实验动物中心）；m199培养基（美国gibco公司）；胎牛血清（美国hyclon公司）；血管内皮生长因子（vegf，美国biovision公司）；碱性成纤维细胞生长因子（bfgf，英国peprotech公司）；乙酰化低密度脂蛋白（diiacldl，德国invitrogen公司）；胰岛素和荆豆凝集素i（fitcueai，美国sigma公司）；ac133和cd34（英国ebioscience公司）；flk1（美国chemicon公司）；淋巴细胞分离液（天津灏洋生物制品

6、科技有限责任公司）；no检测试剂盒（南京建成生物工程研究所）；盐酸吡格列酮（成都宇洋高科技发展有限责任公司）.1．2方法1．2．1实验分组及吡格列酮干预将大鼠随机分为4组，每组6只，a组（对照组）给予9ml/l注射用生理盐水，b，c，d组分别给予盐酸吡格列酮10，20，40mg/（kg·d）.灌胃喂养10d.1．2．2分离培养epcs颈椎脱臼法处死大鼠，剥去皮肤，取四肢置750ml/l乙醇5min；将骨两端软骨用无菌剪刀剪除，用m199培养液冲洗骨髓腔；将骨髓细胞悬液轻置于淋巴细胞分离液表面、离心

7、并吸取乳白色单核细胞层，m199培养液洗涤后用含vegf，bfgf的完全培养液重悬、计数并接种到培养瓶中，4h后将培养瓶翻面.1．2．3epcs表型鉴定培养6d的细胞用2.5g/l胰酶和0.2g/l乙二胺四乙酸消化并接种于盖玻片.24h后向细胞爬片孔内加入10mg/ldiiacldl100μl并置37℃孵育1h，多聚甲醛室温固定10min，pbs漂洗后加入10mg/lfitcueai100μl，避光孵育1h，pbs洗涤、晾干后封片，激光共聚焦显微镜观察.1．2．4no检测将培养4d的细胞消

8、化、计数后以1.5×104/孔接种于96孔板培养.按no试剂盒说明书，24h后于每孔吸上清100μl，采用硝酸还原酶法特异性将各孔上清液中no3-还原为no2-，并测定no2-浓度，从而间接反映no含量.1．2．5凋亡检测将培养4d的细胞消化，不完全培养液(无血清)培养24h后加入含血清的完全培养液培养.3d后再次消化贴壁细胞，以1000r/min离心5min后弃上清，行双标记流式细胞术检测.1．2．6增殖能力检测分离epcs并以1.5×104/孔接种96孔板.培养7d后向每孔培养