人肝癌细胞总rna电转染树突状细胞对t细胞的激活效应

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1、人肝癌细胞总RNA电转染树突状细胞对T细胞的激活效应作者：单铁英苏安英唐军民【摘要】目的：采用Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA电转染人外周血树突状细胞（DendriticCell,DC），观察其对混合T淋巴细胞的体外激活效应。方法：通过密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，用细胞因子体外培养诱导其成为DC。Trizol一步法提取人肝癌细胞总RNA。通过电转染法将人肝癌细胞总RNA导入DC内；通过混合淋巴细胞实验，获取DC激活的特异性效应T细胞。用MTT法测定效应T细胞的增殖率。结果：电转染方法可将人肝癌细胞总RNA导入DC；电转染前后DC分子表达无显著差异。转染了人肝癌细

2、胞总RNA的DC可特异的激活T细胞且增殖率明显增强（P<0.05）。结论：电转染为人肝癌细胞总RNA导入DC提供技术上的可行性；转染了人肝癌细胞总RNA的DC可特异激活T细胞。【关键词】树突细胞核糖核酸转染肝肿瘤【ABSTRACT】Objective:ToinvestigatetheactivationeffectinhumanperipheralbloodDendriticCell（DC)electransfectingtotalRNAofhepatocarcinomacellsextractedbyTrizolinvitro.Methods:Monocytesobta

3、inedfrom9humanperipheralbloodbydensityguadientcentrifugationwereinducedintoDCinthepresenceofcytokinesinvitro.ThetotalRNAofhepatocarcinomacellswasextractedbyTrizolandwaseletransfectedintomonocytederivedDC.EffectiveTcellsweregotbymixedlymphologyreaction,inwhichDCactivatedTcellsgradually,thent

4、heproliferationrateofeffectiveTcellscouldbeexaminedbytheMTTmethod.Results:ElectransfectioncouldsuccessfullymakeRNAintoDC.TherewasnosignificantdifferenceinDCmoleculeexpressionaftertheelectransfection.DCwithtotalRNAofhepatocarcinomacellscouldactivatespecificallyTcellsandProliferationratewassig

5、nificanthigh.Conclusion:ElectransfectionprovidesatechnicalpossibilitytomakehepatocarcinomatotalRNAintoDC.DCwithtotalRNAofhepatocarcinomacellscanactivatespecificallyTcells.【KEYWORDS】DendriticCells,RNA,Transfection,LiverNeoplasms肝癌的治疗手段有多种，但对于进展期肝癌，仍然无法彻底解决肿瘤复发与转移的问题。近年来文献报道肿瘤细胞RNA转染树突状细胞（Dend

6、ritic9Cell，DC）可以诱导强烈的抗肿瘤免疫，但在用RNA电转染DC的方法尚无报道，我们研究了肝癌细胞株Bel7402总RNA电转染的DC对T细胞的体外激活效应，以探索其治疗肝癌的可行性。1材料与方法1．1一般资料新鲜人外周血，购自北京市血库。人肝癌细胞株Bel7402，由北京大学基础医学院免疫学系惠赠。淋巴细胞分离液（Ficoll，1.077g/mL），购自上海试剂二厂。鼠抗人CD14、鼠抗人MHCⅡ、鼠抗人CD86、鼠抗人CD83、鼠抗人S100，即用型二步法生物素检测试剂盒（PV9000）、FITC标记的第II抗体工作液购自北京中山生物技术有限公司。TRI

7、ZOL试剂盒、绿色荧光蛋白（GFP）mRNA，购自Invitrogen公司。1．2方法1.2.1单核细胞、未成熟树突状细胞（ImmatureDendriticCell,imDC）的获得及培养取正常人新鲜外周血200mL，以淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，在37℃和5%CO2饱和湿度条件下培养2h，取贴壁细胞即单核细胞，加入RPMI1640液、10%胎牛血清（FCS）和细胞因子rhGMCSF1000U/mL；rhIL4500U/mL继续培养。第7d收获的细胞为imDC。91.2.2肝