galnt参与鼻咽癌发生发展的分子机制研究

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1、分类号：R762UDC：616密级：一般编号：2013214008广州医科大学硕士学位论文GALNT7参与鼻咽癌发生发展的分子机制研究研究生：罗良导师：聂国辉教授研究生：罗良导师：聂国辉教授申请学位级别：医学硕士论文提交日期：二零一六年四月年级：二零一三级学科专业：耳鼻咽喉科学学位类型：医学临床学位研究方向：鼻咽癌论文答辩日期：二零一六年五月学位授予单位：广州医科大学答辩委员会主席：卢永田教授评议人：刘明教授卢永田教授二零一六年五月广州医科大学2013级硕士学位论文GALNT7参与鼻咽癌发生发展的分子机制研究StudyonmolecularmechanismofGALNT7par

2、ticipatesintheoccurrenceanddevelopmentofnasopharyngealcarcinoma学位申请人：罗良导单师：聂国辉教授位：北京大学深圳医院学科专业：耳鼻咽喉科学二零一六年五月目录摘要…………………………………………………………………………1Abstract……………………………………………………………………4缩略词表……………………………………………………………………8前言………………………………………………………………………9GALNT7参与鼻咽癌发生发展的分子机制研究…………………………材料与方法…………………………………………………

3、………10结果…………………………………………………………………33讨论…………………………………………………………………43结论…………………………………………………………………44参考文献……………………………………………………………45综述………………………………………………………………………48攻读学位期间的研究成果………………………………………………52致谢………………………………………………………………………53学位论文原创性声明……………………………………………………54-0-摘要GALNT7参与鼻咽癌的发生发展并可被MiR-494所调控研究生：罗良导师：聂国辉主任

4、医师摘要【目的】鼻咽癌在中国南方发病率极高，尤其是广东省，发病率较欧美等其他地区高25至30倍。鼻咽癌发生部位的隐匿性和早期临床表现的不明显性使得其早期诊断相对困难。而且，鼻咽癌具有高度侵袭性和转移性，一旦发生转移，患者愈后较差。目前作为鼻咽癌主要治疗手段的放疗亦面临着肿瘤的辐射抗性和组织的严重损伤性两大难以解决的问题。所以，探讨鼻咽癌肿瘤发生、发展的相关机制至关重要。早日找到鼻咽癌特异性的标志物来指导临床进行早期诊断、治疗及预后评估，也必将带来重大的社会效益和经济效益。GALNT7是多肽：N-乙酰氨基半乳糖转移酶(polypeptideN-acetylgalactosaminy

5、ltransferase,ppGalNAc-T)家族中的成员,是催化O-聚糖合成第一步的酶,O-糖基化与细胞识别、肿瘤细胞生长、转移和粘附等功能密切相关。本实验室前期工作利用QPCR的技术验证了GALNT7在鼻咽癌组织和细胞中是低表达的，且其表达与miR-494的表达是负相关的。在此，我们旨在以鼻咽癌为研究对象，采用RNAi沉默GALNT7的方法研究GALNT7在鼻咽癌发生、发展中的生理功能，为鼻咽癌早期诊断、治疗，研制新的基因靶向药物提供重要的实验线索和依据。【方法】我们用qRT-PCR检测miR-494和GALNT7在30例鼻咽癌组织和20例鼻咽正常组织的表达量，双荧光素酶报

6、告载体实验用来验证GALNT7为miR-494的作用靶点，并且用qRT-PCR和westernblot实验分别在mRNA水平和蛋白水平验证了GALNT7为miR-494的作用靶点。MTT和克隆形成实验用来检测GALNT7对鼻咽癌细胞增殖的影响；Transwell和划痕实验用来验证GALNT7对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响；光天蛋白酶3-酶联免疫吸附测定及Hoechst33258染色实验检测GALNT7对鼻咽癌细胞凋亡的的影响；最后用病毒稳转鼻咽癌细胞后注射到裸鼠皮下成瘤，观察1广州医科大学硕士学位论文miR-494及GALNT7对动物水平瘤体生长的影响。【结果】MiR-494表达量

7、在鼻咽癌组织较正常鼻咽组织下调，GALNT7的表达水平与miR-494的表达水平在鼻咽癌细胞中呈负相关。构建荧光素酶报告载体后与miR-494mimic共转染，与对照组相比，鼻咽癌细胞6-10B、9-4E和CNE2细胞中荧光素酶的活性被敲低(GALNT7，p=0.030，p<0.001，p=0.026)；共转染miR-494inhibitor，鼻咽癌细胞中GALNT7活性无明显改变；构建的相应的突变体后再与miR-494mimic、miR-494inhibitor分别共转染后发现