AhR信号通路参与胃癌发生发展的机制研究

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1、中山大学博士学位论文AhR信号通路参与胃癌发生发展的机制研究姓名：彭铁立申请学位级别：博士专业：内科学指导教师：陈旻湖20090520博士学位论文AhR信号通路参与胃癌发生发展的机制研究中的作用并初步探讨其相关机制，最后用AhR特异性激动剂2，3，7，8．四氯代苯并二嗯英(2，3，7，8一Tetrachlorodibenzo-P—dioxin,TCDD)处理胃癌细胞，探讨AhR激动剂对胃癌细胞生长的影响。本研究分为三部分：第一部分AhR在胃癌、癌旁正常组织及胃癌细胞株中的表达第二部分AhR通过c．Jun介导调节MMP．9的表达并促进胃癌细胞的侵袭和转移

2、第三部分AhR激动剂对胃癌细胞生长的影响第一部分AhR在胃癌、癌旁正常组织及胃癌细胞株中的表达目的：通过对胃癌组织和细胞中AhR表达的研究，探讨AhR与胃癌发生之间可能存在的关系。方法：首先采用免疫组化(immunohistochemistry,IHC)方法研究39例胃癌组织及其相应癌旁正常组织中AhR蛋白的表达分布及核转位情况，然后用Westemblot、RT-PCR和real-timeRT-PCR法进一步检测胃癌和癌旁正常组织中AhR蛋白和mRNA的表达，最后用Westemblot、RT-PCR和real-timeRT-PCR法检测五株胃癌细胞中A

3、hR蛋白和mRNA的表达。结果：IHC结果显示，AhR主要在胃组织上皮细胞胞核表达，部分细胞在胞浆中也有弱的表达；AhR在胃癌组织中的阳性表达率为89．74％，明显高于其相应癌旁正常组织48．72％(P

4、01)。RT-PCR结果显示，AhRmRNA的表达水平与蛋白表达水平基本一致，AhRmRNA在胃癌组织中的阳性表达率为92．31％(36／39)，明显高于其相应癌旁正常组织66．67％(26／39)(P

5、KN45、AGS和KATOIII细胞中有较高水平表达，在NCIN87细胞中有中等水平表达。结论：AhR在胃癌组织和细胞中的高水平表达和核转位提示AhR与胃癌的发生密切相关。第二部分AhR通过c-Jun介导调节MMP．9表达并促进胃癌细胞的侵袭和转移目的：探讨AhR激活对胃癌细胞侵袭迁移的影响并初步探索其相应机制。方法：利用组织芯片采用免疫组化的方法观察不同浸润深度胃癌中AhR和MMP．9蛋白的表达；以AhR激动剂TCDD处理胃癌AGS细胞，用划痕试验及Transwell技术观察AhR通路激活对胃癌细胞侵袭迁移能力的影响；分别用AhR激动剂TCDD和Ah

6、R拮抗剂白藜芦醇(Resveratrol,RSV)处理AGS细胞，用RT-PCR检测c．Jun和MMP．9mRNA的表达变化，用Westernblot法检测c-Jun蛋白的表达变化，用明胶酶谱法检测细胞上清中MMP。9蛋白活性改变；最后采用siRNA技术沉默c．Jun基因，再用TCDD处理AGS细胞检测MMP．9的表达变化。结果：胃癌组织芯片免疫组化染色显示，随着胃癌浸润深度的增加和转移，AhR和MMP-9的表达水平也逐渐升高，胃癌组织中AhR的表达与MMP．9的表达密切相关(r--O．555；P--0．000)；随着TCDD浓度的增加，AGS细胞的迁

7、徙距离逐渐增加，Transwell试验显示细胞的迁移和侵袭能力也逐渐增加；TCDD可诱导MMP．9和c-Jun的表达．RSV可抑制TCDD诱导的MMP．9和c-Jurl的表达；当用siRNA技术沉默c．Jun基因后，TCDD诱导的MMP．9表达明显受抑制。结论：AhR可通过c．Jun介导调节MMP．9的表达并促进胃癌细胞的侵袭转移。博士学位论文AhR信号通路参与胃癌发生发展的机制研究第三部分AhR激动剂对胃癌细胞生长的影响目的：探讨AhR激动剂对胃癌细胞生长的影响。方法：用不同浓度(O，O．01O．1，1，10，100riM)TCDD处理AGS细胞相应

8、时间后，用MTT法检测细胞的存活率变化，用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化。结果：MTT结果