降钙素基因相关肽对培养心肌细胞作用的实验观察论文

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1、降钙素基因相关肽对培养心肌细胞作用的实验观察论文【关键词】,.freelolL-1.实验开始后0.5，1.0，1.5及2.0h评定心肌细胞搏动功能.freelolL-1）时呈正性变时、变力作用;高浓度（大于1×10-7molL-1）时呈现一定的抑制作用.Abstract:AIMToinvestigateCGRPcardiotoxicityprofile.METHODSFourday-oldspontaneouslycontractingneona-talprimarymyocardialcellculturesobtainedfrom2-

2、to3-dayoldEM培养基（Gibco，美国）中行细胞计数，以每孔1×106细胞密度接种于含100mLL-1小牛血清DMEM培养基的24孔板培养液中，于37℃CO2培养箱中培养.1.2实验分组与药物处理培养成活4d后的心肌细胞更换无血清培养液并分成4组，每组12孔.A为对照组，B，C，D组分别加入1×10-9，1×10-8和1×10-7molL-1的CGRP.每组再分4个亚组，分别于实验开始后0.5，1.0，1.5及2.0h终止反应.1.3心肌细胞搏动功能评定［3］于倒置显微镜下每孔随机选择3个细胞簇，用细胞搏动正常、部分搏动（SB）

3、、无搏动（NB）及细胞破坏来评定心肌细胞搏动功能.1.4细胞形态学观察［3］倒置显微镜下观察心肌细胞胞质内空泡、颗粒及细胞膜伪足的变化，终止反应时，用无血清培养液洗涤2次，2.5gL-1胰酶消化后，置锥形离心管中200rmin-1离心10min～20min，沿管壁倒入20gL-1戊二醛2mL，固定2.0h后送我校电镜室常规处理、观察.1.5心肌细胞酶代谢及培养液电解质测定［3］终止反应各时间点，取各亚组培养液离心后，用全自动生化分析仪（GEMSTAR，美国）测定上清液中乳酸脱氢酶（LDH），天冬氨酸转氨酶（AST），肌酸激酶（CK）和α-

4、羟丁酸脱氢酶（HBD）的活力，并用电解质分析仪（GEMSTAR，美国）测定K+，Na+，Ca2+，Cl-及CO2的含量.统计学处理:以x±s表示，行t检验和配对t检验.2结果2.1心肌细胞搏动功能变化与对照组（A组）相比，B，C，D组各时点搏动频率均明显加快，但随着药物作用时间的延长，D组搏动频率变慢，部分细胞出现部分搏动或无搏动（Tab1）.表1CGRP对大鼠培养心肌细胞搏动频率及形态学的影响略2.2心肌细胞形态学变化A组心肌细胞呈多角型，胞质内颗粒丰富，表面伸出大量微突起，并有较长的伪足与周围细胞相连，B，C组与A组相似，D组早期有空

5、泡形成，颗粒及伪足减少，随作用时间延长及药剂量增加，损伤逐渐加重（Tab1）.透射电镜见A组心肌细胞呈不规则形，常染色体和异染色体分布均匀，心肌结构清楚，线粒体大小基本一致，嵴平行排列（Fig1）.B组细胞与A组细胞相比，变化不大（Fig2）;C组细胞少有空泡，内质网扩张不明显，溶酶体增多不显著（Fig3）;D组细胞大部分心肌细胞变性，空泡化严重，线粒体肿大，内质网高度扩张，溶酶体增多，核有破碎，嵴排列稍有紊乱（Fig4），但各细胞膜均保持完整.2.3心肌细胞酶、培养液电解质及CO2含量变化各浓度组在各时间点LDH，AST，CK，HBD释

6、放量、电解质浓度及CO2含量也未见显著变化（P0.05）.3讨论离体大鼠及兔心肌灌流显示在1×10-11molL-1～1×10-7molL-1浓度内，CGRP能引起心率加快，心肌收缩力增强，表现为正性变时和变力作用［4］.我们通过对离体大鼠培养心肌细胞的研究表明，1×10-9molL-1，1×10-8molL-1浓度的CGRP对心肌细胞无毒性作用，且使心肌细胞的搏动频率加快，呈正性变时性和变力性效应;较高浓度1×10-7molL-1的CGRP作用初期表现为增强作用，但随药物作用时间延长，正性变力作用减弱并伴有形态学轻微改变.提示低浓度（1

7、×10-9molL-1，1×10-8molL-1）CGRP能改善细胞膜状态，稳定细胞内离子浓度，而高浓度（1×10-7molL-1）CGRP相反还可能加重细胞损伤而呈现浓度双相反应，这与文献报道一致.同时，这也与CGRP对心肌细胞脂质过氧化作用的浓度双相反应时间依赖性一致，提示适当剂量和浓度的CGRP对缺血心肌具有细胞保护作用［5-7］.其机制可能是CGRP增加了跨膜离子内流及肌浆网钙离子释放，使细胞内钙离子浓度增加所致，更进一步的机制还需深入研究探讨.当然，观察时间过长，培养细胞状态总体不佳，也是值得考虑的影响细胞搏动状态的因素.图1－

8、图4略