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1、人参皂苷Rg2对体外培养低氧心肌细胞的保护作用论文【摘要】目的观察人参皂苷Rg2对低氧心肌细胞的保护作用。方法取新生24h的DA）、一氧化氮(NO)的含量。结果人参皂苷Rg2组与正常组心肌细胞凋亡率比模型组明显降低（F=4.75,q=6.44~8.09,P0.05）；人参皂苷Rg2组与正常组心肌细胞SOD活性、MDA和NO含量与模型组相比差异有显著性（F=5.67~13.72,q=4.35~13.68,P0.05）。结论人参皂苷Rg2在体外有抗低氧损伤的作用.freelalgroup,modelgroup
2、andRg2group.Rg2(0.025mmol/L)algroupandmodelgroup.AllodelgroupandRg2groupeothermichermeticcontainer,andgiven95%N2and5%CO2andmixed.Themorphologicalchangesetry(FCM).ThecontentsofMDAandNOandtheactivityofSODinedbybiochemicalmethod.Resultsparedodelgroup,.freela
3、lgroups(F=4.75,q=6.44-8.09,P0.05).paredodelgroup,theactivityofSOD,thecontentsofMDAandNOinRg2groupandnormalgroupshoyocardialcellsagainstanoxiainvitropossiblythroughinhibitingcellapoptosis,increasingtheenergyofantioxidaseandeliminatingfreeradicles.［KEYyocyt
4、es,cardiac;Cellculturetechnique;Anoxia;Freeradicle缺血低氧是众多心脏疾病共有的病理学基础，而临床上对心脏病的治疗也是以改善心肌供血，预防及纠正心肌缺血低氧造成的损害为根本。人参是传统的名贵中药,有重要的药用价值和经济意义。目前，多种人参的复合制剂已广泛应用于治疗心脏疾病［1～3］。人参皂苷Rg2是人参三醇的组成成分，文献报道人参皂苷具有抗细胞凋亡的作用［4,5］。本实验通过体外培养成熟心肌细胞，建立急性气体低氧模型，锥虫蓝染色细胞计数，并做流式细胞仪检测以
5、及酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MAD)、一氧化氮(NO)的含量，以此来探讨人参皂苷Rg2体外是否有抗低氧损伤的作用及其作用机制，为临床用药提供依据。1材料和方法1.1实验动物新生24h的EM、小牛血清(杭州四季青生物材料工程公司)，SOD、MAD、NO试剂盒(南京建成生物工程研究所)，多聚赖氨酸(Sigma公司)。1.3主要仪器设备OLYMPUS,BX50,PM-20系统显微镜(日本),PM-6，OLYMPUS解剖显微镜(日本),二氧化碳细胞培养箱(上海福玛实验设备有限公司),YJ超净
6、工作台（垂直单向流型，苏州市洁净技术研究所）。1.4方法1.4.1心肌细胞培养及鉴定24h大鼠乳鼠，以体积分数0.75的乙醇浸泡消毒，开胸取出心脏，放入PBS中冲洗，尽量去除血迹。将心尖部肌肉剪成2mm×2mm×2mm左右碎块，加入胶原酶、胰蛋白酶消化，反复吹打，悬液沉淀后，吸取上清液(弃第一次收集液)，直至将组织块完全消化为止，然后将所收集的细胞悬液1500r/min离心15min，沉淀PBS洗2次。加入培养液(体积分数0.10的FBS，体积分数0.10HS，M199与DMEM比例为1∶4，0.1mmo
7、l/LMBrdU)，将细胞浓度调整为l×109/L，然后以每孔2mL接种于6孔培养板中。4d后光镜观察。1.4.2分组及处理原代心肌细胞培养4d后，随机分为3组：正常组、模型组及人参皂苷Rg2组，每组4个六孔板。人参皂苷Rg2组加入0.025mmol/L人参皂苷Rg2进行孵育，正常组及模型组加入等量的培养液。1.4.3低氧模型的制备按文献［6］的方法。将已分组给药的细胞继续培养4h,将模型组和人参皂苷Rg2组移入37℃恒温密闭容器中,连续充以体积分数0.95的N2和体积分数0.05的CO2混合气体,流速为
8、20mL/min,持续1h。1.4.4心肌细胞凋亡率的检测将上述处理过的细胞制成单细胞悬液，1000r/min离心10min，去上清，PBS冲洗，体积分数0.75的乙醇固定，400目筛网过滤，加PI染液，应用流式细胞仪（激发波长488nm,发射波长530nm）检测心肌细胞凋亡率。1.4.5心肌细胞上清液中SOD活性及MDA、NO含量的测定按试剂盒说明书的要求先求出样本的最佳加样量。心肌细胞经上述同样处理后,取细胞上清液,按试剂
