微生物限度检查法yx

《微生物限度检查法yx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、微生物限度检查法微生物限度检查在环境的洁净度10000级和局部100级的单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，以防再污染。单向流空气区域、工作台面及环境必须定期按国家《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方法》现行标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。灭菌和培养温度细菌培养温度为30〜35°C；霉菌、酵母菌培养温度为23〜28°C；控制菌培养温度为35〜37°C检验量：检验量指供试品一次检验的用量。一般为10g或10ml；化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包装

2、的药品可酌减（不得少于3g）。检查沙门菌的供试詁其检验量增加10g或lOmlo一般随机抽样不少于检验用量（2个以上最小包装）的3倍量。供试液的制备：用PH7.0无菌氯化钠-蛋白豚缓冲液制备供试液或选用适宜的乳化剂、分散剂、小和剂制备供试液；其用量应验证，在该检验条件无抗菌作用。供试液制备妥后不得超过lh就加入检验用培养基具抑菌活性的供试品当供试品具有抑菌活性时，应将供试液中的抑菌活性消除后，方能依法检查。常用的方法有：■稀释法一一降低供试詁的相对浓度■薄膜法——利用体积差异分离■屮和法——利用化学（生物）专属性灭活■离心法一一利用沉降系

3、数差界分离一、微生物限度检查法验证对药品进行微生物限度检查法吋，首先应进行检测方法的验证。如细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证，以确认该计数方法是否科学、准确、客观。若供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果吋，计数方法应重新验证。验证吋，按供试液的制备，细菌、霉菌和酵母菌计数所规定的方法及下列要求进行。对各试验菌的冋收率应逐-进行验证。验证用菌株及菌液的制备菌株大肠埃希菌CMCC(B)44102、金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003、枯草芽泡杆菌、CMCC(B)63501白色念株菌CMCC(F)98001、黑曲霉菌CMCC(F

4、)98003。菌液制备人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌接种营养肉汤，白色念株菌接种真菌培养基、黑曲霉接种真菌培养基斜面，置规定温度、吋间，培养。取培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成lml含50〜lOOcfu的菌液。验证方法试验组取规定量最低稀释级的供试液lml,和50〜lOOcfu试验菌，每株菌做2个平板,按平板菌落计数方法测定其菌数。采用薄膜过滤法计数吋，最后一次冲洗液中加入50-lOOcfu,过滤，培养，计数。菌液组测定加入的试验菌液的菌数。供试品对照组取规定量的供试液，按平板法测定供试品稀释液木底的菌数。稀释剂对照组取稀

5、释液，加入试验菌，使菌浓度为每lml供试液含50〜lOOcfu,按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。验证试验应独立平行进行3次，分别计算各次试验菌的冋收率。试验组的菌回收率=[(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数1X100%稀释剂对照组的菌冋收率=[(稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数)]X100%结果判断在三次平行试验屮，稀释剂对照组的菌回收率应大于70%o若试验组的菌冋收率均大于70%,符合验证试验，可按此方法测定细菌、霉菌和酵母菌数；若任一次平行试验中试验组的菌回收率均小于70%,

6、不符号验证试验，应采用培养基稀释法、离心集菌法、过滤法、屮和法等方法或这些方法联合使用消除供试品抑菌活性，并重新验证。验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同吋进行。二、检查法阴性对照试验:取试验用的稀释剂lml,于无菌平皿屮，注培养基，凝固，培养。每种计数培养基各做2个平板，均不得长菌。在特殊情况下，营养琼脂培养基上长霉菌、酵母菌或玫瑰红钠琼脂培养基上长细菌，则应分别点计霉菌、酵母菌、细菌菌落数，以菌落数高的培养基屮的菌数为计数结果报告。数报告规则：•宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在30〜300之间，霉菌平均菌落数在30〜100之间

7、的稀释级，作为菌数报告。•当仅有1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。•当同吋有2个稀释级的菌落数符合上述规定吋，视两者比值（比值为高稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值除以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值）而定。若比值不大于2,以两稀释级的菌落数乘以稀释倍数的均值报告菌数；若比值大于2但不超过5时，以低稀释级的菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。当出现比值大于5,或高稀释级的菌落数人于或等于低稀释级的菌落数等异常情况时，应查明原因再行检查，必要吋，应进行方法的重新验证。•当各稀释级的平均菌落数均小于30,以

8、最低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告菌数。•各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1吋，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。三、控制菌检查控制菌检查法的验证试验菌