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《小檗碱抑制人子宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、小檗碱抑制人子宫内膜癌细胞增殖及转移机制的研究【摘要】目的探讨小檗碱抑制人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和转移的机制。方法四甲基偶氮唑蓝法检测小檗碱对人子宫内膜癌Ishikawa细胞株的抑制作用;流式细胞仪观察对细胞周期分布的影响;ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子白细胞介素-8(IL-8)的浓度变化;应用Western印迹法检测经小檗碱干预该细胞48h后,细胞核因子-кB(NF-кB)信号途径中p65的变化。结果小檗碱可显著抑制Ishikawa细胞生长,呈时间剂量依赖性。小檗碱可阻滞细胞于G0/G1期。细胞培养上清液中IL-8的浓度随着干预时间延长而
2、减少(P<0.05)。小檗碱作用48h后,细胞中NF-кBp65表达明显下降(P<0.05)。结论小檗碱具有抗人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖作用,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制细胞产生IL-8,并能够阻断NF-кB信号通路,从而抑制子宫内膜癌的转移。【关键词】小檗碱;子宫内膜癌;Ishikawa细胞株;细胞周期;细胞核因子-кB;白细胞介素-8Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofBerberineonhumanendometrialcarcinomacelllineIshikawa.MethodsThechangesof
3、cellproliferationofIshikawacellstreatedwithBerberinewereobservedbyusingMTTassay.Thecellcycleexpressionsweredeterminedbyflowcytometry.TheconcentrationofIL-8inthesupenmatantfluidwasmeasuredbyELISA.AndNF-кBp65weredeterminedbywesternblotassay.ResultsBerberinecouldinhibittheproliferationo
4、fIshikawacellsinvitrosignificantlyinadose-andtime-dependentmanner(P<0.05).TheG0/G1phasearrestwasinducedbytreatmentafter48hours(P<0.05).TheconcentrationofIL-8inthesupenmatantfluidweredecreased.CellularNF-кBp65levelsdecreasedinBerberine-treatedcellsafter48hours(P<0.05).ConclusionBerber
5、inecouldinhibitIshikawacellproliferation,induceG0/G1phasearrest,andinhibitthemetastasisofendometrialcarcinomabyinterferingwiththeNF-кBsignalingpathway.Keywords：Berberine;endometrialcarcinoma;celllinerIshikawa;cellcycle;NF-кB;IL-8小檗碱是清热解毒中药黄连的主要有效成分,具有抗炎、抗高血压、抗糖尿病、抑制血小板聚集、抗肿瘤和免疫调节等起促进
6、作用[4]。因此,本实验从细胞及分子水平探讨小檗碱对人子宫内膜癌Ishikawa细胞株的抑制作用及其对炎性因子IL-8和NF-кBp65表达的影响,为临床应用小檗碱治疗和预防子宫内膜癌转移提供实验依据。1实验材料1.1细胞系人子宫内膜癌Ishikawa细胞,本院实验室保种传代。1.2试剂及仪器DMEM/F12培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素均购自北京迈晨科技公司。胰蛋白酶为美国GIBCO公司产品。小檗碱,纯度99.5%,购自Sigma公司(B3251-10G)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)、RnaseA及碘化吡啶(PI)购自Sigma公司。IL-8ELISA试剂盒购
7、于美国Abcom公司。兔抗人NF-κBp65(C22B4)抗体购自CellSingnaling公司。辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG购自北京中杉金桥公司。美国BDFacscalibur流式细胞仪,OlympusIX51倒置显微镜。2实验方法2.1细胞培养将人子宫内膜癌Ishikawa细胞置于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,加入青霉素100U/mL和链霉素100μg/mL,37℃、5%CO2条件下培养,倒置显微镜检查细胞生长情况以及细胞密度,每2～3d消化传代1次,取对数生长期细胞进行实验。2.2小檗碱的配置小檗碱溶解于少量二甲基亚砜(
8、DMSO),再以PBS液
