小檗碱对人高转移肺癌细胞系PG细胞增殖和转移的影响及机制研究

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1、北京中医药大学硕士学位论文小檗碱对人高转移肺癌细胞系(PG)细胞增殖和转移的影响及机制研究姓名：蒋艳申请学位级别：硕士专业：中西医结合基础指导教师：黄启福20040501中文摘要研究目的：肿瘤的恶性表型、浸润和转移严重威胁着人类生命。但现用抗癌药物仍存在临床疗效不理想、毒副作用大等问题。近年来，中药以其低毒低成本的优势作为治疗肿瘤的替代疗法日益得到人们的重视。寻找有效的抗癌中药及研究其药理作用已引起世界医学研究者的重视。小檗碱为清热解毒中药黄连、黄柏等植物中的主要成分，属异喹啉生物碱，药用其盐酸盐

2、，是消化系统感染的常用药。近年研究发现，小檗碱还具有抑制肿瘤细胞生长及炎症过程中自细胞与血管内皮细胞粘附的作用。为了进一步探讨小檗碱抗肿瘤作用的作用机制，本实验通过离体实验初探小檗碱对人高转移肺癌细胞株PG细胞增殖及转移的影响及其机制，以期为中药治疗肿瘤的研究奠定基础。研究方法：本研究选用人高转移肺癌细胞系(PG细胞)作为肿瘤模型，小檗碱的终浓度分别为2．5、5、10、20、40ug／ml。用MTT法测定小檗碱对PG细胞增殖能力的影响及对HUVEC毒性的筛选。用流式细胞术测定小檗碱对PG细胞细胞周

3、期及凋亡的影响。用激光共聚焦显微镜观察小檗碱诱导PG细胞氧自由基的产生及小檗碱对PG细胞内钙离子浓度及线粒体膜电势的影响。用虎红染色法测定PG与HUVEC之间的粘附率。用荧光染色法测定小檗碱对PG细胞及1lag／mlTNF一仪诱导的HUVEC细胞表面粘附分子CD44及E1)54的表达。研究结果：小檗碱对PG细胞生长的影响：小檗碱能够抑制PG细胞增殖，且随药物浓度增加抑制效应增强，呈浓度依赖性(P<0．05，P<0．01或P<0．001)。小檗碱对PG细胞细胞周期具有阻滞作用，40¨g／ml的小檗碱

4、能引起PG细胞的凋亡。小檗碱作用6h、12h后只有在终浓度大于等于10¨g／ml时开始产生活性氧自由基，作用243．后低浓度的小檗碱就能诱导活性氧自由基的产生。小檗碱对PG与HUVEC粘附的影响：一方面，小檗碱单独作用子HUVEC，小檗碱与TNF一(7-共同作用HUVEC6h和24h后，低中高三个浓度的小檗碱均可抑制TNF—c【诱导的PG—HUVEC粘附的增高，且呈浓度依赖性，高浓度小檗碱的抑制作用与TNF—cL对照组相比具有显著性差异(9<0．05)。另一方面，小檗碱单独作用PG细胞，小檗碱作用

5、PG6h、12h后，高浓度能抑制其对HUVEC的粘附(P(0．01，P(0．05)；药物作用24h后，小檗碱各剂量组均能显著抑制PG-HUVEC的粘附(P(0．05或P(o．01或P(0．001)，且随浓度升高抑制作用增强。小檗碱对粘附分子及细胞膜流动性的影响；小檗碱能够抑制T／'／F—c【诱导的HUVEC表面粘附分子CD44和CD54表达的增高，小檗碱还能促进PG细胞表面粘附分子CD44和CD54表达的增高。小檗碱作用24小时后可以降低PG细胞膜的流动性及CD44分子的流动性。4小檗碱对人高转移

6、肺绋细胞系(PG)细胞增殖和转移的影响及机制_

7、lJf宄结论：小檗碱对PG细胞增殖具有抑制作用，并且这种抑制作用可能与调节细胞内活性氧自由基产生从而影响细胞周期进程相关。小檗碱阻遏肿瘤的转移机制之一，可能是通过调节两种细胞表面粘附分子的表达，从而抑制PG与HUVEC间的粘附而发挥作用的。关键词：小檗碱；PG细胞；增殖：粘附分子AbstractABSTRACToBJEC’rIVETumorisabigthreatagainstthehealthofhumanbeings．Althoughtherea

8、remanymedicineemployedincancerdisease，thetoxicityofthemonnormaltissuesisacriticalproblemthatlimitstheiruse．Recently,theuseofsomeherbshasattractedagreatdealofattentionasoneofaltemativecancertherapiesfromtheviewpointoflesstoxicityandcostbenefit．Berberin

9、e，allisoquinolinealkaloid，hasawiderangeofpharmacologicaleffects，includinganti．tumoreffect．yettheexactmechanismisunknown．Wedesignaseriesofexperimentstostudytheanti--tumorandanti—metastasiseffectandmechanismofberberine．METHoDSTheproliferationofh