hcv核心抗原检测(elisa法)

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1、1.检验目的与原理1.1检验目的规范丙型肝炎病毒核心抗原检测试验，确保检测结果准确性和重复性。可用于临床辅助诊断是否感染丙型肝炎病毒。1.2检验原理应用ELISA法原理检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原，用2株丙型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体包被酶标板，另2株丙型肝炎病毒核心抗原的单克隆抗体标记辣根过氧化物酶，加入TMB显色液后显色，用来检测血清或血浆中的丙型肝炎病毒游离核心抗原。1.3分析参数样品量100μL试剂量100μL方法ELISA反应时间90分钟反应温度37℃2.样本收集和贮存2.1原始样本系统血清（包括SST管）和血浆

2、（EDTA-K2、肝素锂、肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1、CP2D、CPD、草酸钾），尿液（晨尿、随时尿、24小时尿等）或其它体液（羊水等）使用玻璃管或塑料管分离样本，无黄疸、无溶血、无脂血，已分离出的样本应立即分析。2.2试管及填充物类型血清样本需用标准试管或有分离胶的真空管，收集3ml血液。待血液凝固后3500rpm离心5分钟，分离血清。2.3保存条件及时间2.3.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。2.3.2标本保存时

3、间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定5d，在-20℃最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。2.3.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。3.试剂3.1试剂成分丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂盒（酶联免疫法），湖南康润药业有限公司，国药准字3401179。试剂盒组分：1.抗HCV-cAg单克隆抗体包被酶标板；2.抗HCV-cAg酶标记抗体工作液；3.HCV-cAg阳性对照；4.HCV-cAg阴性对照；5.浓缩洗涤液；6.TMB显色液A；7.TMB显色液B；8.终止液；9.附件：自

4、封袋、封板模和产品说明书。3.2试剂准备试验前提前将所需的试剂盒从贮藏冰箱领出，室温平衡30分钟。3.3试剂贮藏要求（StorageInstruction）未打开的试剂盒保存于2-8℃，效期12个月。不可冻存。4.仪器TECAN酶免工作站。5.校准见TECAN酶免工作站SOP。6.操作步骤6.1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。6.2加样：将微孔条固定于支架，按序编号。每次检测均需设置阴性对照、阳性对照和空白对照各2孔。空白对照孔直接加入样品稀释液200微升，其余每孔加样品稀释液100微升，分别在相应孔加入待测样品、阴性对照和阳

5、性对照各100ul。6.3温育：充分混匀，封板，置37°C孵育60分钟。6.4洗板：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。6.5加酶：每孔加入酶结合物200ul。6.7温育：充分混匀，加上封板膜，置37℃温育30分钟。6.8洗涤：小心揭掉封板模，用洗涤液洗涤5遍，最后一次尽量扣干。6.9显色：每孔加入显色剂A、B各50ml，轻轻振荡混匀，37℃避光显色10分钟。6.10测定：每孔加终止液50ml，轻轻振荡混匀，用酶标仪读值，在双波长450nm/630nm（单波长检测以空白对照调零）下读取各孔A值。7.质量控制无8.检验结果报告

6、8.1 结果计算 CUT OFF值=阴性对照孔A值+0.06。（阴性对照A值大于0.1和阳性对照A值小于0.6时应重新试验，阴性对照A值≤0.06时以0.06计算。）待测样品A值＜CUT OFF值时，判为阴性。 待测样品A值≥CUT OFF值时，判为阳性。8.2结果审核由资深专业人员负责检验结果的审核。确认反应板结果的有效性及室内质控在控。确认反应板反应外观与判读的结果一致，核对判断的阴阳性结果个数。审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报告单的审核者处签字。审核与其他标志物等的关系，如出现与临床不符甚至相悖的情况，

7、应分析与查找原因。对弱阳性标本再重复试验确定它的结果。如果重复检测都是弱阳性结果的标本建议对其进行跟踪检测。8.3报告传输及打印结果经审核后，确认准确无误后发出报告。报告单上标明结果的参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的信息。如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。8.4测量不确定度的评定方法见《免疫激素测量不确定度的评估报告》。9．参考范围阴性，提示没有检测到丙型肝炎病毒核心抗原。10.可报告区间阴性～阳性。11.危急值报告不适用。12.方法的局限性12.1本试剂仅用于定性检测人血清或血浆样品中

8、的HCV游离核心抗原。12.2由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测结果阴性并不排除HCV感染的可能，检测结果阳性必须结合确诊试剂或其他指标和临床信息进行分析。13．临床意义H