实验四 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量

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1、周次日期课时安排3课时课题实验三液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸含量重点难点教学目标1、了解高效液相色谱仪的结构和工作原理；2、理解苯甲酸和山梨酸的高效液相色谱方法。教学方法教学手段1．要求学生实验前认真预习实验内容，实验前教师检查并批改预习报告，了解学生预习情况。2．实验前先进行重点的讲解和示范基本操作、实验步骤中的注意事项，实验过程中巡回指导。教学过程实验操作参考GB/T5009.29-2003食品中山梨酸、苯甲酸的测定第二法 高效液相色谱法一、原理  试样加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根

2、据保留时间和峰面积进行定性和定量。二、试剂  方法中所用试剂，除另有规则外，均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度水，溶液为水溶液。甲醇：经滤膜（0.5μm）过滤。稀氨水（1+1）：氨水加水等体积混合。乙酸铵溶液（0.02mol/L）：称取<1.54g>乙酸铵，加水至1000mL，溶解，经0.45μm滤膜过滤。碳酸氢钠溶液（<20g>/L）：称取<2g>碳酸氢钠（优级纯），加水至100mL，振摇溶解。苯甲酸标准储备溶液：准确称取<0.1000g>苯甲酸，加碳酸氢钠溶液（<20g>/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100

3、mL，苯甲酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。3教学过程山梨酸标准储备溶液：准确称取<0.1000g>山梨酸，加碳酸氢钠溶液（<20g>/L）5mL，加热溶解，移入100mL容量瓶中，加水定容至100mL，山梨酸含量为1mg/mL，作为储备溶液。苯甲酸、山梨酸标准混合使用溶液：分别取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液1、2.5、5、10、15mL，放入100mL容量瓶中，加水至刻度，经0.45μm滤膜过滤。三、仪器高效液相色谱仪（带紫外检测器）四、分析步骤试样处理<>汽水：称取<5.00g>~<10.0g>试样，放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，

4、用氨水（1+1）调pH约7。加水定容至10mL~20mL，经滤膜（HA0.45μm）过滤。<>果汁类：称取<5.00g>~<10.0g>试样，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当体积，离心沉淀，上清液经0.45μm滤膜过滤。<>配制酒类：称取<10.0g>试样，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（1+1）调pH约7，加水定容至适当体积，经0.45μm滤膜过滤。高效液相色谱参考条件<>柱：YWG-C18<4.6mm>×<250mm>，10μm不锈钢柱。<>流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L）（5:95）。<>流速：1mL/

5、min。<>进样量：10μL。<>检测器：紫外检测器，230nm波长。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。课后作业教学后记2分钟出现的可能是溶剂峰脱机文件调用实验结果3推一针浓度峰面积提取10ml雪碧（只含苯甲酸）稀释至50ml稀释五倍六个芒果（只含山梨酸）4,5组雪碧样品4,5组芒果样品时间样品＼序号12345雪碧芒果6.5min7min苯甲酸739180335237347109882257＼183610min山梨酸84021084144847712650＼5736杂质123453样品＼序号浓度＼ug/ml102550100150峰面积

6、7391803352373471098884021084144847712650数据处理：雪碧检测样品中苯甲酸含量y=2257代入标准曲线y=73.548x-47.704得x=31.33ug/ml由于检测样品为稀释了五倍的雪碧，所以c1=5*31.33=156.5ug/ml芒果饮料检测样品中山梨酸含量y=5736代入标准曲线y=84.55x-21.065得x=68.10ug/ml由于检测样品为稀释了五倍的原饮料，所以c3=340.5ug/ml由GB中饮料的山梨酸含量不得超过200ug/ml，碳酸饮料中苯甲酸含量不得超过500ug/ml，可知

7、测得样品符合国家标准。芒果饮料的速溶图中5min处出现峰，并非苯甲酸。因为笨甲酸的峰出现时间为6.293min,查配料表及其他数据可推出其为乙酰胺酸钾。3