实验一-薄层层析法测定果酱中苯甲酸-山梨酸的含量.doc

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1、实验一薄层层析法测定果酱中苯甲酸、山梨酸的含量一、实验原理先将样品酸化，然后用乙醚提取苯甲酸和山梨酸。再将提取液浓缩，点样于聚酰胺板上，经展开、显色后，并与标准点比较可进行定量计算。二、实验试剂6mol/LHCl(1:1)乙醚4%NaCl酸性溶液无水乙醇无水硫酸钠聚酰胺粉：200目展开剂：正丁醇：氨水：无水乙醇（7+1+2）（用于苯甲酸）异丙醇：氨水：无水乙醇（7+1+2）（用于山梨酸）显色剂：0.04%溴甲酚紫（用50%的乙醇配制，并用0.1mol/LNaOH调至PH=8）苯甲酸标准液（2mg/mL）：精密称取0.2000g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定

2、容。山梨酸标准液（2mg/mL）：精密称取0.2000g山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100mL容量瓶中定容。三、实验仪器玻璃板（10×18cm）微量注射器（10uL,20uL）层析缸喷雾器吹风机四、实验操作⑴样品处理称取25g混合均匀的样品，置于100mL分液漏斗中加0.5mLHCl酸化，用15、10mL乙醚提取两次，每次振摇1分钟，静置分层后将醚层分出，合并乙醚提取液。用3mL4%NaCl酸性溶液洗涤两次，弃去水层，静置15分钟，再分离出水层，将乙醚提取液通过无水硫酸钠移入25mL容量瓶中，加乙醚定容。吸取10.00mL乙醚提取液分两次置于10ml具塞离心管中，在约40℃

3、水浴上挥干，加入0.1mL乙醇溶解残渣，备用。⑵聚酰胺薄层板的制备称取1.6g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15mL水，研磨3分钟，在10×20cm玻璃板上使其均匀即涂成0.25-0.30mm厚的薄层，室温下干燥1小时，置于烘箱内80℃干燥1小时，取出后置干燥器中备用。⑶点样在距薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1uL、2uL样品液，同时分别点1uL、2uL苯甲酸、山梨酸标准溶液，点间距1.5cm。⑷展开显色将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开槽中，展开槽内壁贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干，喷显色剂，斑点黄色，背景蓝色。⑸定性与定量把样品斑点与

4、标准斑点比较，若与标准斑点同一位置线上出现样品斑点，说明样液中存在苯甲酸或山梨酸。然后根据斑点的面积大小及颜色深浅确定样品点的苯甲酸、山梨酸的含量，再进行计算。五、计算式中：A——点样用样液中苯甲酸（山梨酸）的含量mgm——称取的样品质量gV1——溶解残渣时加乙醇体积mLV2——点样的体积mL复习题一、薄层层析法测定果酱中苯甲酸的含量实验原理（20分）二、简述薄层板上的固定相为硅胶时，化合物的极性和展开剂的极性对Rf值的影响？（20分）三、选择本实验所用试剂、仪器（30分）四、设计实验步骤（30分