蛋白含量测定细则

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1、样品批号：BRADFORD（CommassiBlueG-250）(BSA0.5mg/ml)管号BSA含量（µg/ml）BSA体积（µl）ddH2O（µl）考马斯G-250（ml）OD5950001002.50.00015010902.50.098210020802.50.195315030702.50.293420040602.50.395525050502.50.499630060402.50.590735070302.50.6891、BSA配制过程1）牛血清白蛋白（Albuminbovineserum，BSA）：批号911110；规格1g；生

2、化纯；德国柏林格尔曼海姆进口分装，中国医药公司北京采购供应站经销，4℃保存。2）标准蛋白溶液BSA母液配制（2.5mg/ml）精确称取25mg牛血清蛋白（BSA）用ddH2O精确定容至10ml。具体操作：取一支50mL小烧杯，用电子天平精确称取25mg牛血清蛋白（BSA），用少量ddH2O溶解，转移至10ml容量瓶中，用ddH2O清洗烧杯中残留的牛血清蛋白（BSA），一并转入容量瓶中，最后定容至10ml，混匀后分装至小瓶或EP管中，每份1ml，写好标签，于-20℃冻存。3）BSA标准液（500µg/ml）取1mlBSA母液（2.5mg/ml），用

3、移液管精确量取4mlddH2O，混溶，即稀释5倍，得BSA标准液（500µg/ml），于4℃备用。2、考马斯亮蓝G-250配制储备液：精确称取350mg考马斯亮蓝G-250，加入100ml95%乙醇和200ml88%磷酸，充分搅拌混匀。具体操作：精确称取350mg考马斯亮蓝G-250，，用100ml量筒量取95ml无水乙醇，加ddH2O5ml至100ml，再量取200ml88%磷酸，一并加入500ml大烧杯中，玻璃棒搅拌均匀后倒入500ml的棕色瓶中，盖盖，室温下可长期保存备用。工作液：取30ml储备液，加入15ml95%乙醇和30ml88%磷酸

4、，用ddH2O精确定容至500ml。待充分混匀后用Whatman1号滤纸过滤，置于500ml的棕色瓶中室温保存。3、工作曲线的制作过程准备8支10mL试管，用微量进样器或50微升-100微升移液管准确加入BSA和ddH2O（注意直接用洗耳球吹到试管底部），再加入CBBG，充分混合。8号管（空白管）调零点，按常规操作过程进行比色，用721分光光度计测量，于595nm处读取光吸收值。以蛋白浓度对595nm处的光吸收值作图，得到蛋白质浓度标准曲线。4、样品的测定过程1）样品的稀释过程将目的蛋白溶液稀释适当倍数，使测定值位于标准曲线中部的线性区间内。取0

5、.5mlEP管三个，分别加入450μl，450μl，200μlddH2O；依次倍比稀释为10×，100×，200×。第一管加入50μl目的蛋白原液；混匀后，往第二管加入50μl；混匀后，往第三管加入200μl，混匀，共得400μl稀释200倍的目的蛋白溶液。2）分析过程用微量进样器取稀释后样品液100微升，其它操作过程同标准曲线。测定记录（595nm处吸收值在0.1-0.3）稀释200倍样品：试管编号595nm处吸收值平均值mg/mL10.2130.21521.620.21730.2164（空白）05（空白）0测定记录（595nm处吸收值在0.3

6、-0.5）稀释100倍样品：试管编号500nm处吸收值平均值mg/mL10.4290.429721.520.43330.4274（空白）05（空白）03）其它说明：比色皿：1cm直径玻璃比色皿；仪器：721分光光度计，上海4）用Excel做工作曲线，相关系数≧98%（附曲线）样品蛋白含量：21.6mg/mL操作人（签字）—————————复查人（签字）—————————2011年月日