淀粉、总糖、还原糖的测定方法

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1、淀粉的测定方法---蒽酮法一．原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二．仪器设备三角瓶50ml容量瓶100ml移液管10ml、1ml漏斗圆底烧瓶1000ml离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计三．试剂盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮四、试剂的配制和标准曲线的绘制1.葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖（AR级）0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。2.标准曲线的绘制取6支

2、干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液（100μg/ml）0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线3.80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml4.1当量的盐酸配制43毫升浓盐酸加水定容至500ml5.10%氢氧化钠配制10g氢氧化钠溶于100ml水中6.蒽酮试剂：1克蒽酮溶于72%的H2SO4

3、1000ml(98%的H2SO4+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2－3周。五实验步骤1.分离出水溶性糖0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇80℃水浴浸提30分钟冷却后离心（3600转）5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。重复三次2.水解残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。3.测定取滤液1ml（空白用1ml蒸馏水代替），加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN

4、*0.9/WC—样品淀粉含量（μg/g）W—样品重量（g）A—标准曲线查得的糖量（μg）N—样品提取液占样品反应液的倍数蒽酮比色法测总糖：实验步骤：1、可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80℃水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。2、总糖的测定：取提取液1毫升于试管中（空白中用1毫升蒸馏水代替），加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后

5、在620nm波长处比色。蒽酮试剂：1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H2SO4+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱保存2~3周。3、标准曲线的绘制：取干洁试管6支，依次加入葡萄糖标准液（100μg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，绘出标准曲线。4、计算：C=AN/WC—样品总糖含量（μg/g）W—样品重量（g）A—标准曲线查得的糖量（μg）N—样品提取液

6、占样品反应液的倍数总糖、还原糖、淀粉测定所需试剂无水葡萄糖（AR级）蒽酮乙醇浓盐酸氢氧化钠3，5—二硝基水杨酸（DNS）酒石酸钠结晶酚亚硫酸钠滤纸，PH试纸，小标签纸3，5—二硝基水杨酸（DNS）比色法测还原糖仪器与用具：25ml刻度试管；离心管；100ml玻璃烧杯；100ml三角瓶；刻度吸管1ml、2ml、10ml；沸水浴；离心机；电子天平；分光光度计。试剂：1.1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml，摇匀，冰箱中保存备用。2.3,5－二硝基水杨

7、酸(DNS)：6.3g3,5－二硝基水杨酸和262ml2mol/lNaOH，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶备用。实验步骤：1．可溶性糖的提取：准确称取烟叶样品0.100g，置于离心管中，加入8ml80%乙醇，于80℃水浴浸提30min，冷却后于4000转离心5min收集上清液，残渣再加入8ml80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。2．还原糖的测定：取提取液1ml于试管中（空

8、白中用1ml蒸馏水代替），加入DNS试剂1.5ml，摇匀，于沸水浴中加热5min，取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml，摇匀，然后在540nm波长处比色。3．标准曲线的绘制：取干洁25ml试管6支，依次加入葡萄糖标准液（1mg/ml）0、0.