淀粉、总糖、还原糖的测定方法

淀粉、总糖、还原糖的测定方法

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时间:2018-01-04

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1、淀粉的测定方法---蒽酮法一.原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去,而后烟叶中淀粉用适量Hcl,因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖,再按葡萄糖测定进行。根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二.仪器设备三角瓶50ml容量瓶100ml移液管10ml、1ml漏斗圆底烧瓶1000ml离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计三.试剂盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮四、试剂的配制和标准曲线的绘制1.葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中,定容至100毫升,用前取此液10毫升,再用水稀释至100毫升。2.标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管,依次移入

2、葡萄糖标准液(100μg/ml)0,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00ml后,再从1至6试管依次补加1.0,0.8,0.6,0.4,0.2,0ml蒸馏水后,再分别加入蒽酮试剂5毫升,于沸水中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色,记录OD值,以吸光值为纵坐标,糖含量为横坐标,绘出标准曲线3.80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml4.1当量的盐酸配制43毫升浓盐酸加水定容至500ml5.10%氢氧化钠配制10g氢氧化钠溶于100ml水中6.蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H2SO4+240的蒸

3、馏水),棕色瓶冰箱保存2-3周。五实验步骤1.分离出水溶性糖0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇80℃水浴浸提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。重复三次2.水解残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶,摇匀后烘箱105度加热3.5小时,冷却后加10%氢氧化钠6ml中和,过滤,蒸馏水定容100ml。3.测定取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替),加入蒽酮试剂5ml,摇匀,于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN*0.9/WC—样品淀粉含量(μg/g)W—样品重量(g)A—标准

4、曲线查得的糖量(μg)N—样品提取液占样品反应液的倍数蒽酮比色法测总糖:实验步骤:1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克,置于离心管中,加入8毫升80%乙醇,于80℃水浴浸提30分钟,冷却后于4000转离心5分钟,收集上清液,残渣再加入8毫升80%乙醇,再次浸提,重复两次,将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。2、总糖的测定:取提取液1毫升于试管中(空白中用1毫升蒸馏水代替),加入蒽酮试剂5毫升,摇匀,于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色。蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的H2SO41000ml(98%的H

5、2SO4+240的蒸馏水),棕色瓶冰箱保存2~3周。3、标准曲线的绘制:取干洁试管6支,依次加入葡萄糖标准液(100μg/ml)0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml和蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml,再分别加入蒽酮试剂5毫升,于沸水浴中加热10分钟,冷却后在620nm波长处比色,记录OD值,绘出标准曲线。4、计算:C=AN/WC—样品总糖含量(μg/g)W—样品重量(g)A—标准曲线查得的糖量(μg)N—样品提取液占样品反应液的倍数总糖、还原糖、淀粉测定所需试剂无水葡萄糖(AR级)蒽酮乙醇浓盐酸氢氧化钠3,5—二硝基水杨酸

6、(DNS)酒石酸钠结晶酚亚硫酸钠滤纸,PH试纸,小标签纸3,5—二硝基水杨酸(DNS)比色法测还原糖仪器与用具:25ml刻度试管;离心管;100ml玻璃烧杯;100ml三角瓶;刻度吸管1ml、2ml、10ml;沸水浴;离心机;电子天平;分光光度计。试剂:1.1mg/ml葡萄糖标准液:准确称取100mg分析纯葡萄糖(预先在80℃烘至恒重),在小烧杯中用蒸馏水溶解后定容至100ml,摇匀,冰箱中保存备用。2.3,5-二硝基水杨酸(DNS):6.3g3,5-二硝基水杨酸和262ml2mol/lNaOH,加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5

7、g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至1000ml,贮于棕色瓶备用。实验步骤:1.可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100g,置于离心管中,加入8ml80%乙醇,于80℃水浴浸提30min,冷却后于4000转离心5min收集上清液,残渣再加入8ml80%乙醇,再次浸提,重复两次,将三次提取的上清液合并于100ml容量瓶中并定容至100ml。2.还原糖的测定:取提取液1ml于试管中(空白中用1ml蒸馏水代替),加入DNS试剂1.5ml,摇匀,于沸水浴中加热5min,取出后立即浸入冷水冷却至室温定容至25ml,摇匀,然后在540nm波长处

8、比色。3.标准曲线的绘制:取干洁25ml试管6支,依次加入葡萄糖标准液(1mg/ml)0、0.

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