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1、hVEGF165在兔骨髓间充质干细胞中的表达作者：王宾沈来根朱越锋李鲁滨郭治宇刘振杰【摘要】目的培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Westernblot法检测hVEGF165在细胞中的表达。结果通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞,RT-PCR法、Westernblot法检测结果均表明hV
2、EGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。结论成功培养兔体外骨髓间充质干细胞,基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。【关键词】目的培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。方法体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Westernblot法检测hVEGF165在细胞中的表达。结果通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞,RT-PC
3、R法、Westernblot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。结论成功培养兔体外骨髓间充质干细胞,9基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。【Abstract】ObjectiveTocultivateandaccreditrabbitmesenchymalstemcells,andtodetecttheexpressionofhVEGF165aftergenetransfection.MethodsRabbitmesenchymalstemcellswasaccredi
4、tedexpressionofantigenCD29、CD44、CD45、HLA-DRaftercultivatedinvitro.TheconstructedplasmidscontainingrightsequenceofhVEGF165weretransfectedintorabbitmesenchymalstemcellsbyadenovirus.TheexpressionofhVEGF165wastestedbyRT-PCRandwestern-blot.ResultsTheexpressionofa
5、ntigenofcellsindicatedthecellswererabbitmesenchymalstemcells.TheresultsofRT-PCRandwestern-blotshowedthatthetransfectedcellscouldexpresshVEGF165.ConclusionTherabbitmesenchymalstemcellscansuccessfullyexpresshVEGF165aftergenetransfection.【Keywords】mesenchymalst
6、emcellsvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)genetransfection,expression骨髓间充质干细胞（mesenchymalstem9cells,MSCs）是一种具有多向分化潜能的细胞，可分化成多种间质细胞，如成骨细胞，软骨细胞，脂肪细胞，也可分化成神经系统的神经元细胞、神经胶质细胞和脉管系统的血管内皮细胞,成为近年来基因组织工程研究的热点。血管内皮生长因子(VEGF)是一种高特异性的内皮细胞有丝分裂原,能促进血管内皮细胞分裂、增殖,形成新血管［１］。本
7、研究通过体外培养兔骨髓间充质干细胞,用基因转染技术将VEGF基因导入细胞,观察其在细胞中的表达。在此基础上可将骨髓间充质干细胞与VEGF结合植入缺血区,通过MSCs与VEGF的双重作用,来促进局部血管增生,治疗慢性缺血性疾病。1材料与方法1.1材料(1)细胞和腺病毒:兔骨髓间充质干细胞自行培养和鉴定,含hVEGF165的非扩增型腺病毒和含GFP的非扩增型腺病毒购自上海××生物基因科技发展有限公司。(2)主要试剂：DMEM培养液和淋巴细胞分离液购于上海××生物有限公司；胰酶购自杭州×××公司;TRIZOL购自Si
8、gma公司;mRNA逆转录酶（M-MLV）购于Promega公司；蛋白裂解液购自Satancruz公司;羊抗人hVEGF165单克隆抗体购于Sigma公司;兔抗山羊二抗购于北京××公司;ECL化学发光试剂购自联科生物公司;R－Phycoerythrin（R-PE）标记的鼠抗人HLA-DR的单克隆抗体购于BDBioscience公司,可跟兔交叉反应;鼠抗兔CD44、CD45单克隆抗体购于
