不同性别及去花对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量的影响

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1、不同性别及去花对穿龙薯蓣中薯蓣皂苷元含量的影响作者：孟祥才杨国辉于冬梅孙晖王喜军【摘要】目的探讨不同性别及去花对薯蓣皂苷元含量的影响。方法采用高效液相色谱法测定不同时期穿龙薯蓣根茎中薯蓣皂苷元的含量。结果与结论雌性植株薯蓣皂苷元的含量显著高于雄性，雌性去花后含量明显降低，与雄性植株接近。雌性、雌性去花和雄性三者具有相似的季节积累规律。【关键词】穿龙薯蓣;性别;薯蓣皂苷元　穿龙薯蓣为薯蓣科植物穿龙薯蓣(穿山龙)Dioscoreanipponica7Makino的干燥根茎，分布于东北、华北、西北(除新疆)及河南、湖北、山东、江苏、安徽、浙江、江西、四川等地。穿山龙

2、的根状茎含有薯蓣皂苷元，其结构与甾体激素类药物相近，为合成各种类型的避孕药品和甾体激素类药物的重要原料。世界上合成甾体激素类药物大部分是以薯蓣皂苷元为原料的，而我国几乎全部是以其为原料。穿龙薯蓣为雄雌异株，对板栗、石刁柏、银杏等许多雌雄异株植物研究表明其生理代谢表现出明显的差异，以致影响体内的化学成分含量和质量[1～3]，植物性别可采用激素进行调控，在生产中也有一定的应用[4，5]。另外，疏花、打顶等阻断植物生殖生长的措施不仅会提高产量，也会改变活性成分积累[5，6]。为此，本文以薯蓣皂苷元含量为指标，对不同性别穿龙薯蓣及雌性去花的质量差异及其季节积累规律进行

3、研究，为穿龙薯蓣的质量控制及资源的合理利用提供依据。　　1材料与仪器　　1.1材料2007年春季将播种于铁力林业局宝马林场的二年生种苗移栽于黑龙江中医药大学药用植物园内，将雌性穿龙薯蓣分为两部分，其中一部分随时摘除花蕾，从2008年5月下旬起，每隔2周分别对雄性穿龙薯蓣、去花雌性穿龙薯蓣和不去花的根茎进行取样，阴干。　　1.2试药薯蓣皂苷对照品购自中国药品生物制品检定所;乙腈(色谱级,美国迪马(DIK-MA)公司);娃哈哈纯净水(杭州娃哈哈集团有限公司);甲醇(分析级)。　　1.3仪器LC-2010A型自动进样高效液相色谱仪，KDC-160HR高速冷冻离心机,

4、AS3120-B超声震荡仪。　　2方法与结果7　　2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18(200mm×4.6mm);流动相为甲醇-水(94∶6)，流速为1.0ml/min，柱温40℃，检测波长203nm，进样量10μl。　　2.2对照品溶液的制备精密称取薯蓣皂苷元对照品约5mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并制成每毫升含0.5mg的溶液。　　2.3供试品溶液的制备[7]精密称定穿山龙药材粉末约0.5g，置50ml锥形瓶中，准确加入甲醇5ml，超声提取30min，取上清液离心15min(3000r·min-1);再量取2ml上清液于10ml试管中，回收甲

5、醇至干，加入2mol/L盐酸0.6ml，90℃加热水解3h，放冷，向其中加7～8滴过饱和碳酸钠溶液;用氯仿萃取3次，第1次加入氯仿5ml，后两次加入3ml，每次萃取20min，合并3次萃取液，蒸干氯仿，残渣加甲醇使溶解，定容于5ml容量瓶中，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得供试品溶液。　　2.4线性关系考察精密称取经干燥的对照品5.31mg，用色谱甲醇溶解并定容至10ml，配制成浓度为0.531mg/ml的对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜滤过后，分别吸取2.0，4.0，8.0，10.0，12.0，16.0μl，依次进样，测得薯蓣皂苷元的峰面积。以进样量(u

6、g)为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。结果表明，薯蓣皂苷元在1.02～8.16μg范围内线性关系良好。回归方程：Y=623277X+657304,r=0.9997。　　2.5精密度实验精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，重复进样5次，测定其峰面积，经计算RSD为1.63%，表明仪器精密度良好。　　2.6稳定性实验取同一份供试品溶液，分别在(0，6，12，24，48h)精密吸取10L注入高效液相色谱仪，测定其峰面积，计算RSD为1.82%(n=5)。结果表明，供试品溶液在72h内稳定。　　2.7重复性实验取8月1日采集的同一批雌性样品,

7、精密称取5份,按“2.3”项下操作,在上述色谱条件测定薯蓣皂苷元的含量,RSD分别为2.99%(n=5)。　　2.8回收率实验精密称取5份8月1日采集的同一批雌性样品药材粉末0.2g,分别加入一定量的对照品,按“2.3”项下操作。在上述色谱条件下测定,得出薯蓣皂苷元平均回收率分别为98.7%，RSD分别为1.7%。　　3讨论7　　大量研究表明，在逆境生境中雄性植株生长良好，雄性个体比例较大。相反，雌性在较适宜的生境中生长良好，数量占优势，主要是由于不同性别的植物对逆境的耐受程度不同所致[8]。栝楼雄株的光合色素,可溶性蛋白质的量,超氧化物岐化酶、过氧化物酶活高

8、于雌株,而雌株的丙二醛、可溶性糖、紫外