小鼠组织中龙胆苦苷含量的液相色谱-串联质谱测定

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1、小鼠组织中龙胆苦苷含量的液相色谱-串联质谱测定【摘要】目的建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定小鼠肝、心、脾、肺、肾组织中龙胆苦苷浓度的方法，为其组织分布研究奠定基础。方法样品处理采用固相萃取法，内标物扑热息痛，色谱柱:KromasilC8柱(3.5μm，2.1mm×150mm)，流动相为甲醇-1%甲酸溶液-乙腈(60∶30∶10)，流速170μl·min-1，用ESI离子化和正离子多离子反应监测方式检测。结果该法测定龙胆苦苷在组织中线性范围为3～3000ng·ml-1，检测限3ng·ml-1，色谱峰保留时间为2.40min，各组

2、织方法回收率均在89.2%～107.2%，批内、批间精密度RSD值小于12%，提取回收率大于78%。结论该方法准确、方便、快速、灵敏度高，适用于大批量组织样品中龙胆苦苷含量测定。【关键词】龙胆苦苷;液相色谱-串联质谱;组织;测定　　Abstract：ObjectiveToestablishLC-MS/MSdeterminationmethodofgentiopicrosideinliver,heart,spleen,lungandkidneyinmice.MethodsTissuesampleswerepreparedbasedonsoli

3、d-phaseextractionwithParacetamolasinternalstandard,andseparationwasmadethroughaKromasilC8column(3.5μm,2.1mm×150mm),themobilephaseconsistedofmethanol-1%Formicacid-acetonitrile(60:30:10)withtheflowrateof0.179ml·min-1.Thesamplewasdetectedbythepositiveelectrosprayionization(ES

4、I)-MSmethodundermultiplereactionmonitor(MRM)mode.ResultsThelinearityofgentiopicrosiderangedfrom3to3000ng·ml-1,thedetectionlimitwas3ng·ml-1.Therecoveryofthismethodrangedfrom89.2%～107.2%.ThevalueofRSDofintradayandinterdaywaslessthan12%.Meanrecoveryratewasmorethan78%.Conclusi

5、onThemethodisaccurate,simpleandeffectiveforthesimultaneousdeterminationofgentiopicrosideintissueofmice.　　Keywords：Gentiopicroside;LC-MS/MS;Tissue;Determination　　龙胆苦苷(Gentiopicroside)具有促进胃分泌、保肝、抗炎等作用[1],是常用中药秦艽和龙胆中的主要活性成分。建立其组织样品中含量测定方法，了解其组织内分布对于指导临床合理用药以及理解其药性具有积极意义。　　目前关

6、于龙胆苦苷分析方法的报道大多是血液或体外样品测定，由于组织成分复杂，有酶等多种生物活性物质存在，影响药物的稳定性及提取效率，因此组织样品处理有其特殊之处。冯英菊等[2]曾建立了大鼠组织样品中龙胆苦苷含量测定方法，其最低检测限为5009ng·ml-1，药代研究动物给药量120mg·kg-1，龙胆临床常用量仅9g，其用量远低于文献的给药量，而由于药物体内分布及药效与剂量相关[3]，高剂量下组织分布的结果难以代表临床的效果。为研究龙胆苦苷组织内药代与药效关系，本实验建立了液相色谱—串联质谱(LC-MS/MS)法测定小鼠灌胃给药后肝、心、脾、肺、肾

7、组织中龙胆苦苷的浓度，以期为龙胆苦苷的体内分布及代谢动力学研究奠定基础。　　1材料与仪器　　1.1动物KM小鼠，♂，体质量25～28g，广东省医学实验动物中心提供(动物合格证号：0053981)。　　1.2仪器API3000型液相色谱-三级四极杆质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)，AB公司，美国;1100液相色谱系统，美国Agilent公司;超低温冰箱(NEWBRUNSWICK英国);电子天平(BS224S北京赛多利斯仪器系统有限公司);IKA涡漩震荡仪(GENIUS3)和IKA匀浆仪(T10);白洋台式离心机(G20河北省安新县白洋离

8、心机厂);Waters20管型固相萃取仪(美国Waters公司);watersHLB固相萃取小柱(1cc/30mg,美国Waters公司);Milli-Q纯水机(美国Millip