在线免疫亲和净化 液相色谱串联质谱快速测定

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第9期2011年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1341～1346DOI:10．3724/SP．J．1096．2011．01341在线免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱快速测定中草药及中成药中10种真菌毒素*赵孔祥葛宝坤陈旭艳许泓(天津出入境检验检疫局，天津300461)摘要将复合毒素免疫亲和柱的柱填料填充至不锈钢柱(35mm×4．6mm)，制成可重复使用的在线免疫亲和净化柱。在线净化过程的上样溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS，pH7．4)，清洗溶剂为水

2、，转移溶剂为乙腈-水(1∶1，V/V)。采用PBS/甲醇溶液提取样品中真菌毒素，提取液直接进行在线免疫亲和净化-液相色谱-质谱/质谱分析，本方法可同时测定中草药及中成药中10种真菌毒素(伏马毒素B1、伏马毒素B2、T-2毒素、HT-2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇和β-玉米赤霉烯醇)。本方法的定量限(LOQ)为1～5!g/kg，各基质在3个水平添加回收率(n=6)为62．3%～107．1%;相对标准偏差(RSD)为2．1%～15．0%。关键词在线免疫亲和净化;中草药;中成药;

3、液相色谱-串联质谱;真菌毒素1引言［1］近年来，中药中存在的真菌毒素备受关注。药用植物采集后如干燥不及时、贮存不当及制备与［2］加工过程中处理不善，均可能污染各种真菌，并产生真菌毒素。在目前已发现的300多种真菌毒素中，黄曲霉毒素(Aflatoxins)、赭曲霉毒素(Ochratoxin)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone)、伏马菌素(Fumo-nisins)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol)、T-2毒素(T-2toxin)、杂色曲霉素(Sterigmatocystin)［3，4］等与人体健康安全相关。［5］检测真

4、菌毒素的方法有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫分析法等。近年来，抗原抗［6］体特异性结合的免疫亲和层析技术，在真菌毒素及药物残留的前处理净化领域得到了广泛应用。免疫亲和层析联用技术，也称在线(On-line)免疫亲和色谱，通过柱切换技术将免疫亲和净化柱串［7］［8］联于HPLC或HPLC-MS/MS进行检测，样品的纯化及分析均实现自动化。肖付刚等采用免疫亲和［9］层析-液质联用法检测蓝藻中的微囊藻毒素。Moretti等将免疫亲和柱直接串联到分析柱上，测定了牛［10］奶和肉中氯霉素。Benjamin等建立了免疫亲和净化与LC/MS

5、或LC/MS/MS联用的克伦特罗检测方［11］［12］法。Holtzapple等使用高效免疫亲和色谱柱实现了血清中氟喹诺酮类药物在线净化。Liang等制备了在线拟除虫菊酯类杀虫剂的免疫亲和柱，实现复杂样品中此类化合物的高效、快速检测。本研究采用制备的在线免疫亲和净化柱，实现了中草药及中成药中的赭曲霉毒素A等10种真菌毒素的在线净化-液相色谱-串联质谱测定。本方法使用了高选择性的免疫亲和净化技术，降低了净化成本。2实验部分2．1仪器与试剂TSQQuantumUltraAM三重四极质谱仪、Turboflow在线液相色谱净化系统(两台Tran

6、scend600泵及CTC多功能进样器)，配有AriaOS及Xcalibur操作软件(美国ThermoFisher公司);振荡器(日本YAMATO公司);3-18K高速离心机(德国Sigma公司);MILLI-Q纯水器(美国Millipore公司)。复合毒素免疫亲和柱(myco6in1，美国Vicam公司)。甲醇、乙腈和甲酸(色谱纯，美国Dikma公司);醋酸铵(色谱纯，天津光复精细化工研究所);NaCl，2011-01-04收稿;2011-05-20接受本文系国家质量监督检验检疫总局科研项目(No．2008IK144)资助*E-mai

7、l:wwwkongxiang@163．com1342分析化学第39卷KCl，KH2PO4，Na2HPO4·12H2O，NaCl，HCl(分析纯，天津风船化学试剂科技有限公司)。磷酸盐缓冲液(PBS，pH7．4)。真菌毒素标准品:黄曲霉毒素B1(AFB1，纯度99%)、黄曲霉毒素B2(AFB2，纯度99%)、黄曲霉毒素G1(AFG1，纯度99%)、黄曲霉毒素G2(AFG2，纯度99%)、赭曲霉毒素A(OTA，纯度99%)、HT-2毒素(HT-2，纯度98%)、T-2毒素(T-2，纯度98%)、伏马毒素B1(FB1，纯度99%)、伏马毒素B

8、2(FB2，纯度99%)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone，纯度为99%)，均购于美国Alexis公司;10mg/Lα-玉米赤霉醇(α-Zearalanol)、β-玉米赤霉醇(β-Zearalanol)