应用等位基因特异性pcr检测胆固醇酯转运蛋白基因突变

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1、应用等位基因特异性PCR检测胆固醇酯转运蛋白基因突变作者：周代锋，蔡望伟，云美玲，张勇，习隽丽，王镇【摘要】目的：建立检测胆固醇酯转运蛋白(cholesterolestertransferprotein，CETP)基因6种常见突变的等位基因特异性PCR技术。方法：应用针对CETP基因TaqIB(G→A)、I405V(A→G)、D442G(A→G)、R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)这6种常见的突变位点设计的等位基因特异性PCR技术，对海南汉、黎族人群中CETP基因突变类型进行了检测，同时对经上述等位基因特异性PCR检测的样本进行序列测定。结果：在海南汉、

2、黎族人群中，TaqIB(G→A)突变位点可检测出GG、GA、AA3种基因型，I405V(A→G)突变位点可检测出AA、AG、GG3种基因型，D442G(A→G)突变位点可检测出AA、AG2种基因型，但在海南汉、黎族人群中未检测到R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)3种突变类型，用等位基因特异性PCR鉴定的CETP基因突变的基因分型结果与序列测定结果完全符合。结论：等位基因特异性PCR技术操作简便，重复性和稳定性好，可作为鉴定CETP基因突变类型的可行方法。【关键词】胆固醇酯转运蛋白基因;等位基因特异性;聚合酶链反应;基因分型12　　[ABSTRACT]Ob

3、jective:Toestablishtheallelespecificpolymerasechainreaction(ASPCR)techniqueforthedetectionof6normalmutationsofcholesterolestertransferprotein(CETP)gene.Methods:DesignedtheASPCRsystemaccordingtothe6mutationsofCETPgene,TaqIB(G→A),I405V(A→G),D442G(A→G),R451Q(G→A),A373P(G→C)andI14A(G→A).Detected

4、themutationsinLiandHannationalitiesofHainanprovincebythedesignedmethodandsequencedpartialmutationsamples.Results:3genotypesweresuccessfullydetectedinTaqIB(G→A)mutationsitewhichwereGG,GA,AA,3genotypesweresuccessfullydetectedinI405V(A→G)mutationsitewhichwereAA,AGandGG,and2genotypesweresuccessful

5、lydetectedinD442G(A→G)mutationsitewhichwereAAandAG,whileonlythewildgenotypecouldbedetectedseparatelyinR451Q(G→A),A373P(G→C)andI14A(G→A)mutationsiteswhichwasGG.AlltheresultsaboveprovidedbytheASPCRwereexactlyconsistentwiththesequencingresults.Conclusion:TheASPCRwithadvantagesofstabilityandsimp

6、lifyisaneffectivemethodforinvestigationofthemutationsofCETPgene.　　[KEYWORDS]Cholesterolestertransferprotein(CETP)gene;Allelespecific(AS);Polymerasechainreaction(PCR);12Genotyping　　胆固醇酯转运蛋白(cholesterolestertransferprotein，CETP)通过介导胆固醇酯(cholesterolester，CE)在高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)和富含载

7、脂蛋白B的脂蛋白之间的交换，在胆固醇逆向转运过程中起着关键的作用，与动脉粥样硬化(arteriosclerosis，AS)的发生、发展密切相关[1]。CETP基因存在着多种变异,影响CETP的浓度和活性,引起机体的脂代谢异常。为了研究海南汉、黎族人群中CETP基因TaqIB(G→A)、I405V(A→G)、D442G(A→G)、R451Q(G→A)、A373P(G→C)和I14A(G→A)这6种突变类型的频率，笔者建立了简便、快速检测CETP基因上述6种突变的等位基因