ena多肽抗体谱免疫印迹检测课件

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1、第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测黑龙江中医药大学临床医学院诊断教研室黄萍第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测第一节概述一、何为ENA?ENA(Extractablenuclearantige)盐水可提取性核抗原的总称。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测核抗原：组蛋白：不溶于水DNA；不溶于水ENA：可溶于生理盐水是非组蛋白核蛋白，属酸性核蛋白抗原，是许多小分子量的RNA和多肽组成。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测二、多肽抗体谱ENA抗体是指能与核中盐水可提取抗原发生特异性结合抗体，既是抗核抗体的一部分。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测ENA多肽抗体谱是由许多小分子量的RNA

2、和多肽组成。不同的uRNA各有其相应的抗体。目前发现的相应的抗体已有十余种，其中，国际上共认的对风湿有特异的诊断价值的有七种。故将这七种抗体叫做多肽抗体谱第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测三、免疫印迹免疫印迹（ImmunoblotIBT）又称免疫转印技术。是一项新的生化技术。它对研究工作的影响与内切酶的发现和PCR的基因扩增技术是等量齐观的。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理：将凝胶电泳与固相免疫结合起来，其主要的操作过程分三个步骤。1、分离盐水可提取抗原（ENA）中多肽按分子量的大小，先用SDS—聚丙烯酰胺凝胶分离第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基

3、本原理：2、转移将分离的组份从凝胶上转移到固相基质上，如硝酸纤维膜第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理：3、测定对转移后的组份进行免疫法测定，显示出蛋白带。既通过抗体的反应，用酶联免疫吸附法观察与抗体反应的多肽（呈显色带）的数量与分子量第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫印迹的基本原理：免疫转印技术实际上是一项将凝胶电泳技术、固定化技术及分子亲和技术三者融为一体的免疫转印技术。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：1、高分辨率免疫转印技术综合了电泳技术分辨率强的特点。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹

4、检测免疫转印技术优点：2、高灵敏度免疫转印技术综合了免疫反应敏感性高的特点，可检出最小蛋白质1pg(10-12g)第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：3、高特异性免疫转印技术综合了免疫反应特异性，根据抗原抗体的特异反应，同一条蛋白印迹上可做多项分析。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：4、高度稳定性蛋白印迹膜便于保存，可存放6-12个月。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测免疫转印技术优点：5、设备简单，操作容易免疫转印技术在临床检验中必有远大前程，并可能代替许多现有的传统检验方法。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测第二节检测对象ENA多肽抗体谱早期

5、诊断SLE和多种风湿病，有较高的特异性和敏感性，有助于结缔组织病的诊断和鉴别诊断第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测一、风湿病的定义风湿病学是一门以内科学和临床免疫学为基础的新兴学科其研究的对象是风湿性疾病，包括所有不同原因，以及不明原因引起的骨、关节、肌疾病。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测广义：涉及所有骨、关节、肌肉疼痛和炎症的疾病感炎性：莱姆（Lyme）氏病代谢性：痛风内分泌性：甲状旁腺功能亢进遗传性；粘液多糖病退化性：骨关节炎生态环境性：大骨节病第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测狭义：主要指自身免疫性结缔组织疾病类风湿性疾病骨关节炎(RA)系统红斑狼疮(SLE)干燥综合症

6、(SS)硬皮病(PSS)皮肌炎和多发行肌炎(DM/PM)混合性结缔组织病(MCTD)第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测二、适应症1、临床上怀疑有风湿性疾病（结缔组织病或自身免疫性疾病），需进一步确诊者。2、已诊断为某种风湿性疾病，但需明确是否合并其它风湿性疾病，以指导治疗者。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测二、适应症3、诊断未明，但有下列症状，需排除或确诊何种风湿性疾病者：⑴、原因不明发热伴有关节或肌肉疼痛。⑵、淋巴结肿大或白血球减少或血小板减少或溶血性贫血。⑶、皮疹或不典型面部红斑，光敏感。⑷、蛋白尿。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测⑸、心包炎或胸膜炎。⑹、癫痫或精神、神经

7、症状。⑺、习惯性流产。⑻、雷诺氏现象。⑼、肿胀手或手指、足趾皮肤变硬。第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测⑽、肌肉有压痛或抬臂、下蹲起立时困难。⑾、下肢出现网状青紫。⑿、肺间质病变或肺动脉高压。⒀、经常口干、眼干、或反复腮腺炎。⒁、易口腔溃疡或大量脱发。第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测⒂、吞咽困难，食道蠕动减弱。⒃、青年女性有偏头痛。⒄、荧光抗核抗体阳性。⒅、关节疼痛。⒆、长期反复性原因不明低热。第三章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测三、送检标本血清第六章ENA多肽抗体谱免疫印迹检测