慎重看待ENA多肽抗体的临床意义

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1、慎重看待ENA多肽抗体的临床意义慎重看待ENA多肽抗体的临床意义2010-11-11唐福林众所周知，抗核抗体(ANA)对风湿免疫性疾病的诊断有着举足轻重的作用。ANA中的抗ENA(anti-extractablenuclearantigen)抗体则更具诊断特异性。如其中的抗Sm、抗ulRNP、抗Jo-1、抗Scl-70、抗SS-A和抗SS-B抗体分别与系统性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织病(MCTD)、多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)、硬皮病(SD)和干燥综合征(SS)密切相关。WesternBlot或称免疫印迹(IB)法是目前国内测定ENA多肽抗体的主耍方

2、法。国内销售的ENA多肽抗体试剂盒，其抗原来自兔胸腺丙酗粉。厂商标出该试剂盒可测出抗Sm、抗ulRNP、抗SS-A、抗SS-B、抗Scl-70、抗Jo-1和抗rRNP等7种抗体，被视为检测ENA抗体最为简便、敏感、高效、特异的方法。多年的临床实践发现这一检测手段并非完美。市于某些检验员缺乏免疫印迹的知识，以及临床医师过分地看重实验报告，以至为数不少的病人被误诊、误治,造成了不可弥补的医源性疾患。因此很有必耍提醒临床医师耍慎重对待ENA多肽抗体的检测。IB是将可溶性核抗原(ENA)置于电场屮，经浓缩分离后，转印在硝酸纤维膜上，然后该膜被加上病人血清，进行抗原一抗体

3、反应。再经过酶标抗体和底物作用，显示出多肽抗体条带。与标准分子量比较，可以了解ENA屮被特异性抗体所识别的相应抗原决定簇的分子量。这一方法的优点是能利用某种特定分子量的蛋白质抗原进行特异性抗体的检测。以恒佳公司试剂盒为例，抗Sm出现抗28000、29000和13500三条带；抗ulRNP为抗73000、32000和17500三条带；抗SS-A为抗52000条带；抗SS-B为抗48000、47000和45000三条带；抗Jo-l为抗55000条带；抗Scl-70为抗86000和70000两条带；抗rRNP为抗38000、16000和15500三条带。问题的关键是当

4、出现三条带中的一条带或两条带能否报告为某种特定抗体。举Sm抗体为例，如果认为29000、28000、13500三条带同时出现即为抗Sm抗体阳性,那么当仅有29000和（或）28000,和（或）13500-条或二条带出现时能否报抗Sm抗体阳性?我们曾遇到外地转京求治的“SLE”患儿，病初发热，因给予氨节青霉素而过敏出现皮疹、关节痛，被疑为“SLE”,当时检测ANA阴性，而多肽抗体中抗13500阳性，被视为抗Sm阳性，即用大量激素进行“正规”治疗，导致激素的严重不良反应。家长带患儿辗转南北，不仅造成了极大的经济损失，而且严重影响了患儿的身心健康。我们对198例抗29

5、000、28000和13500三条带均阳性的病人进行临床分析后发现，其中21例不能诊断为SLE,198例血清再以高特异性的免疫双扩散检测，其中156例抗Sm阳性，两者符合率为92%；对148例仅有抗29000和（或）28000的病例临床分析后发现,其中83例并不能诊为SLE,再将这些血清进行双扩散检测，仅4例为抗Sm抗体，而50%则显示为抗ulRNP抗体。这支持抗29000、28000可能与抗ulRNP发生交叉，并非是抗Sm抗体的标记条带；即使有对抗Sm抗体诊断较为特杲的13500出现，也并不能100%认为抗Sm抗体阳性。SLE的诊断必须密切结合临床。我们还对u

6、lRNP抗体中的7种不同排列组合（17500,32000,73000,32000和17500,17500和73000,32000和73000,73000、32000和17500）的血清与免疫双扩散对照发现，73000、32000和17500三条带同吋出现时与免疫双扩散的符合率为85%O其他组合与免疫双扩散的符合率均低于50%,尤其仅抗32000更应慎报抗ulRNP抗体阳性。大部分抗32000阳性病人，临床上并非为结缔组织病。再如抗JoT抗体,被视为PM/DM的标记抗体，在多肽抗体检测中，抗Jo-1抗体显示为抗55000条带，那么是否抗55000即为抗Jo-1抗体

7、呢?我们分析了20例抗55000阳性的病人，仅7例临床上符合PM,其余的13例中，有7例为未分化结缔组织病，6例为非结缔组织病（其中3例为肿瘤）。相反20例免疫双扩散抗Jo-1抗体阳性的病人，17例为PM/DM,其余3例均为未分化结缔组织病。这表明免疫双扩散检测出的抗Jo-l对PM/DM诊断特异性远较IB法高。同样仅52000抗体也并非是抗SS-A阳性。在130例抗52000阳性的病例中37%（50/130）为非结缔组织病，而且在正常健康人屮也可有抗52000阳性。今年5月在上海召开的华夏风湿病大会，上海仁济医院对上海地区血清交流质控评估后指出：IB法对判断抗S

8、m有误，仅29000、2