常用血细胞化学染色原理及应用

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1、常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶（peroxidase，POX）能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化，显棕色四甲基苯醌二胺，再加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆内酶所在的部位。[临床意义]　临床上主要用于急性白血病类型的鉴别：急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞POX染色均呈阴性反应；急性粒细胞白血病　原粒细胞POX染色呈局灶分布的阳性反应；急性早幼粒细胞白血病　颗粒增

2、多的早幼粒细胞POX染色呈强阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞POX染色多呈细小颗粒弱阳性反应。（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义[原理] 过碘酸-雪夫（Pexiodicacid-schiff，PAS）染色又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基（CHOH-CHOH）经过碘酸（Periodic9acid）氧化，转变为二醛基（CHO-CHO），与雪夫（Schiff）试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS

3、）阳性反应。[临床意义]1）急性白血病类型的鉴别 红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；急性早幼粒细胞白血病　异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。2）各类贫血的鉴别 MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫

4、血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。93）其他细胞类型的鉴别 戈谢细胞呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞PAS染色为弱阳性，空泡中心阴性。非霍奇金淋巴细胞PAS染色呈阳性反应；R-S细胞则为弱阳性或阴性反应。骨髓内转移的腺癌细胞PAS染色呈强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。（3）中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理和临床意义（偶氮耦联法，Kaplow）[原理] 中性粒细胞内碱性磷酸酶（neutrophilealkalinephosphatese

5、,NAP）在pH9.2-9.8时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚耦联成不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。[临床意义]1）白血病 急性粒细胞白血病NAP阳性率及积分值均降低，急性淋巴细胞白血病NAP积分值明显增高；慢性粒细胞白血病（无继发感染时）NAP积分值显著降低，甚至为“0”，类白血病反应NAP积分值明显增高，是两者鉴别的重要检测项目；慢性中性粒细胞白血病NAP积分值显著增高，常在200分/100NC以上，也有利于与慢性粒细胞白血病鉴别。2）其他血液病9各类贫血再障时NAP积分值增高，阵发性睡眠性血红

6、蛋白尿症（PNH）和MDS时NAP积分值一般减低。因此NAP检测有助于与PNH、MDS等疾病的鉴别。真性红细胞增多症时NAP积分值显著增高，继发性红细胞增多症NAP积分正常或降低，这是两者的鉴别方法之一。其他慢性骨髓增生性疾病，如骨髓纤维化、原发性血小板增多症等，NAP积分值增高。恶性组织细胞病时NAP积分值明显减低，而反应性组织细胞增多时NAP积分值往往增高，有助于两者鉴别。细菌性感染时NAP积分值增高，病毒感染或寄生虫、立克次体感染时NAP积分值一般正常或降低。该检测对鉴别细菌感染与其他感染有一定价值。（4）氯乙酸AS-D萘

7、酚酯酶染色的原理和临床意义[原理] 细胞内的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（naphytholAS-Dchloroacetateesterase,NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸AS－D萘酚，产生AS－D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。NAS－DCE几乎仅出现在粒细胞，其特异性高，因此又称为“粒细胞酯酶”、“特异性酯酶”。[临床意义] 临床上主要用于急性白血病类型的鉴别9急性粒细胞白血病和急性早幼粒细胞白血病原粒细胞NAS－

8、DCE染色多呈（＋）-（＋＋），白血病性早幼粒细胞呈（＋＋）-（＋＋＋）；急性单核细胞白血病　原、幼单核细胞多呈阴性反应；急性淋巴细胞白血病原、幼淋巴细胞呈阴性反应。（5）中性非特异性酯酶染色的原理和临床意义[原理] 中性非特异性酯酶包括醋酸AS-D萘酚酯酶(n