组化染色综合版-2

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1、瑞氏-姬姆萨染色Wright’s-GiemsaStain4.2试剂（1）瑞氏-姬姆萨复合染色液（I液）——瑞氏染色粉1g，姬姆萨染粉0.3g，甲醇（A.R）500ml，中性甘油3.3ml。将瑞氏染粉和吉姆萨染粉置洁净研钵中，加中性甘油研磨，再放入37℃孵箱孵育24小时后，加入少量甲醇研磨，吸出上液，如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中存放一周即能使用。存储时间越久染色效果越好。中性甘油可防止甲醇挥发，使细胞染色较清晰。（2）磷酸盐缓冲液（II液）（pH6.4～6.8）——磷酸二氢钾(K2HPO4)6.64g，磷酸氢二钠(Na2HPO4。12H2O)2.56g，用磷酸盐调整

2、pH，加蒸馏水至1000ml。6.操作方法（1）染色将玻片滴加瑞氏-姬姆萨复合染色液（I液）3～5滴，使其迅速盖满涂片，再按1：1或1：2的比例滴加磷酸盐缓冲液（II液），轻轻摇动玻片使染液充分混合。9．正常结果范围及结果解释1.染色结果偏酸者，则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞的核呈浅色或不着色。2.染色结果偏碱，所有红、白细胞染灰蓝色，颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑紫色或蓝色。中性颗粒也偏碱（紫黑色）。遇此种情况应更换缓冲液。17铁粒染色（IronStain）2．实验原理正常人骨髓中以含铁血黄素的形式储存的铁粒属细胞外铁；而幼红细胞的胞质中含有的铁颗粒属于细胞内铁，这种细胞称为

3、“铁粒幼细胞”。骨髓中细胞外铁和幼红细胞内的铁颗粒与酸性亚铁氰化钾溶液作用，发生普鲁士蓝反应，生成蓝色亚铁氰化钾沉淀，定位于含铁的部位。4.3试剂配制4.3.1酸性亚铁氰化钾溶液4.3.1.1把200g亚铁氰化钾溶于1000ml蒸馏水中。4.3.1.2取5ml200g/L亚铁氰化钾溶液置于试管中，缓缓加入1ml浓盐酸。临用前新鲜配制。4.3.22g/L核固红－硫酸铝溶液取硫酸铝10g加入100mlDH2O再加入核固红EMER出品0.2g，置于37℃水浴中1小时，并经常振荡，使溶解，过滤后使用。贴上“2g/L核固红－硫酸铝溶液”的标签并注明配制日期和失效日期。室温保存。5.2.质控标准正常

4、的阳性结果为：外铁为＋～＋＋，铁粒幼红细胞＞20%。6．操作方法6.1选骨髓小粒丰富的骨髓涂片，用甲醇固定10分钟。（这一步骤可省略）6.2玻片上滴加酸性亚铁氰化钾，染色30分钟。（可置于37℃）。6.3用DH2O冲洗后用核固红染液复染10～15分钟。6.4流水冲洗，晾干，油镜检查。6.5先用低倍镜判断细胞外铁，再用油镜计数100个幼红细胞，观察铁颗粒的多少。177．结果报告7.2.1细胞外铁的判断用低倍镜观察涂片的骨髓小粒，根据骨髓小粒和巨噬细胞的胞质内出现的蓝色颗粒状、小珠状或团块状的多少，把细胞外铁分为五级。－无颗粒＋有少数铁颗粒或偶见铁小珠＋＋有较多的铁颗粒和小珠＋＋＋有很多的铁

5、颗粒，小珠和少数小块状＋＋＋＋有极多的铁颗粒，小珠并有很多的小块，密集成堆7.2.2铁粒幼细胞的判断:胞浆内出现蓝绿色颗粒的幼红细胞即为铁粒幼细胞。阳性程度的标准为：Ⅰ型仅含1个铁颗粒Ⅱ型含2～5个铁颗粒Ⅲ型含6～9个铁颗粒Ⅳ型含10个以上的铁颗粒7.2.3环形铁粒幼细胞的判读标准：含铁颗粒6个以上，其中2/317以上的铁颗粒围绕核周围排列成完全环形或不完全环形（围绕核周围指分布紧靠着细胞核或靠近细胞核的1/3胞浆内，铁颗粒增多时，可分布于外2/3的胞浆内。8．结果解释8.1正常人细胞外铁：＋～＋＋。幼红细胞染为鲜红色，胞浆成淡黄红色，铁粒呈蓝绿色，定位于胞浆中含铁的部位。8.2缺铁性贫

6、血时，骨髓细胞外铁和内铁显著减少或消失，铁粒幼红细胞阳性率为0～16%，平均为4%，铁颗粒极少并着色浅，以Ⅰ型为主，Ⅱ型者极少，Ⅲ型以上者不见。8.3溶血性贫血，巨幼红细胞贫血，脾亢，AA，AL，慢性肾炎伴尿毒症和多次输血等病人的细胞外铁可以增高，细胞内铁以Ⅰ型和Ⅱ型为主，可以见到Ⅲ型，不见Ⅳ型。因此有助于鉴别IDA与非IDA。8.4是诊断铁粒幼红细胞贫血的重要依据，能发现数量不等的环状铁粒幼红细胞，并且多见粗颗粒的Ⅲ型和Ⅳ型铁粒幼红细胞。8.5骨髓增生异常综合征时，细胞外铁丰富。铁粒幼红细胞的百分比增高，常见环状铁粒幼红细胞。在铁粒幼细胞性难治性贫血中，环状铁粒幼红细胞≥15%时，对诊

7、断有重要意义。9．注意事项9.1玻片必须经无铁处理：将新玻片经清洁液浸泡24小时，取出后反复水洗浸入95%酒精24小时，晾干，再浸泡在5%盐酸中24小时，用DH2O反复洗玻片，取出烤干后备用。9.2酸性亚铁氰化钾液必须新鲜配制。9.3最好用骨髓小粒丰富的骨髓涂片进行染色并作细胞外铁观察。17过氧化物酶染色PeroxidaseStain(Pox)2．实验原理粒细胞和一部分单核细胞胞浆内含有过氧化物酶，此酶可将底物中的过氧化氢分解，产生