大鼠腺苷酸环化酶活性测定

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1、中国协和医科大学基础医学教案教研室：药理室课程名称：药理学教师姓名：郭磊教师职称：讲师授课题目：大鼠腺苷酸环化酶活性测定授课对象：八年制医学专业学生。授课学时:5学时。教学目标：1.学习非标记底物(ATP)法测定腺苷酸环化酶(AC)活性的方法以及竞争性蛋白结合法测定cAMP的技术。2.了解多巴胺受点与腺苷酸环化酶的关系，说明神经松弛药作用的部分机理。教学内容:(一)原理。(二)实验方法。(三)结果处理。重点:腺苷酸环化酶活性的测定方法。难点:加样要精确，防止同位素污染。评价手段:实验操作及实验报告。参考资料:(备课用)药理教材及实验讲义。教学

2、目标教学内容教学方法时间分配备注1.掌握非标记底物(ATP)法测定腺苷酸环化酶(AC)活性的方法以及竞争性蛋白结合法测定cAMP的技术。2.了解多巴胺受点与腺苷酸环化酶的关系，说明神经松弛药作用的部分机理。(一)原理:非标记底物法测腺苷酸环化酶(二)实验方法:1.大鼠尾状核匀浆置备:取大鼠脑尾状核加Tris苹果酸缓冲液。2.腺苷酸环化酶活性反应：加样见讲义。3.cAMP的测定：加样见讲义。(二)结果处理：1．计算各双复管cpm均值，包括Cx、CO、B、CT。2．计算Cx－B，CO－B的值。3．计算各标准品和样品管(CO－B)/(Cx－B)的值

3、。4．以标准品S1-S8,（CO-B）/（Cx-B）为纵坐标，cAMP浓度为横坐标作散点图，用直线回归，得到cAMP标准曲线。计算r值，a，b值。得出回归方程。5．以此方程为标准，通过各样品管的(CO－B)/(Cx－B)值可，求出其各自的cAMP值。6．酶活性计算：以每100ul大鼠尾状核匀浆液催化形成的cAMP的量表示AC活性。比较多巴胺和氟哌啶醇对AC的影响。1.提问原理及概念。2.演示仪器操作。1.讲课:20分钟。2.加药:1小时。3.4ºC保育2小时。课后思考题目1.为什么用活性炭？为什么加BSA？2.测定AC还可以使用什么方法？3.

4、反应体系中为什么加ATP？不加会怎么样？4.此实验中有那些因素可能影响你的结果，偏高？偏低？5如果你进一步做此实验，会如何设计？6.加无水乙醇3ml的作用？参考资料药理教材及实验讲义。