第二章_菌种的筛选、选育和保藏

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1、第二章、菌种的筛选、选育和保藏http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc菌种的筛选、选育和保藏概述：1、菌种的作用是决定发酵产品是否具有产业化和商业化价值的关键因素。是发酵工业的灵魂。2、工业用微生物的分类可培养微生物：细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌（霉菌）。未培育微生物：如极端微生物。利用方式有：模拟自然培养法、宏基因组分析法。http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc模拟自然培养法模拟微生物生长的自然环境对未培养微生物进行可培养研究。宏基因组分析法直接依据基因、基因组、蛋白质序列，

2、以及调节表达机制构建高效表达的工程菌等途径进行开发利用。即不通过纯培养过程，而是直接在基因水平上开发。菌种的筛选、选育和保藏http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc第一节发酵工业菌种的分离、筛选一、工业化菌种的要求1、能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成产物。2、有关合成产物的途径尽可能地简单，或者说菌种改造的可操作性要强。3、遗传性能要相对稳定。4、不易感染它种微生物或噬菌体。5、产生菌及其产物的毒性必须考虑（在分类学上最好与致病菌无关）。6、生产特性要符合工艺要求。菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种

3、的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc二、菌种获得的途径1、从菌种保存机构直接购买2、从自然界中筛选3、在生产过程中发酵水平高的批号中重新进行分离筛选三、分离筛选的步骤定方案--样品采集--样品预处理--目的菌富集培养--菌种分离--菌种初筛--菌种复筛--菌种发酵性能鉴定菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc定方案新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌

4、种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。样品采集1、采样对象来源广，获得的可能性大。以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。极端环境菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc从自然界筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc2、采样季节：以温度适中，雨量不多的秋

5、初为好。3、采土方式：在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。样品预处理（见书）目的：提高菌种的分离效率物理方法化学方法诱饵法菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc富集培养目的：增加目标微生物数量方法：等一切能提高目的微生物相对生长速度的手段，培养（固体、液体；分批连续）后使目的

6、微生物在种群中占优势。1、底物2、pH条件3、培养时间4、培养温度菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc菌种分离目的:经过富集的微生物虽然在数量上占优势,但是得到的培养物还是多种微生物的混合物,所以需要进行菌种的分离。常用的分离方法有：1、平板划线分离法2、稀释分离法3、简单平板分离法4、涂布分离法5、毛细管分离法6、小滴分离法菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc菌种的初筛分离得到的菌

7、种，需要进一步筛选选择产物合成能力较高的菌株。生产性能的测定即通过初筛和复筛来确定。初筛：从分离得到的大量微生物中将具有目的产物合成能力的微生物筛选出来的过程。菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc菌种的筛选、选育和保藏发酵工业菌种的分离、筛选方法：1、平板筛选例：水解酶菌株在培养基中加入该酶的底物作为唯一的碳源或氮源，适温培养后根据水解圈和菌落的大小来判断产酶活力的大小。2、摇瓶发酵筛选接近发酵条件，易于扩大培养。特点：简单快速，活性只能相对比较，不能得到确切的产量

8、。http://biotech.ecust.edu.cn/jpkc/fjgc菌种的复筛一般用摇瓶发酵培养，发酵液用精确的分