4.28标本溶血对乙肝表面抗原检测的影响

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1、本文档由www.yxt1101.com云轩亭论文网整理提供！溶血对乙型肝炎表面抗原检测的影响乙型肝炎表面抗原的检测是诊断乙肝的主要指标，随着检验技术的不断发展酶联免疫法因其简便，灵敏度高，特异性强，不需要特殊设备的特点，而被广泛应用[1]。溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素[2]。除常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破坏释放的某些胞内成分也可干扰或影响临床检验结果的判定。由于各种原因造成的溶血，非特异性物质对试验造成影响，致使检验结果出现假阳性，现分析如下1资料与方法1．1一般资料14例乙肝患者检查，86例健康人体检。1．2试剂乙型肝炎病毒表面抗

2、原诊断试剂盒(酶联免疫法ELISA)，上海科华生物技术有限公司生产。1．3方法1．3．1溶血血清制备，将待测血清放置于低温冰箱(-40℃)内冻20min后,取出融化,以3000r/min离心10min，分离溶血血清。溶血和不溶血各1份。从冰箱取出试剂盒室温放置30min，微孔反应条中每孔加入待测标本50μL，设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照(或阳性对照)各1滴,并设空白对照1孔。然后每孔加入酶结合物1滴(空白对照除外)，充分混匀，封板，置37℃避光孵育30min，弃孔内液体，洗板5次后拍干。每孔加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，置37℃避光孵育15min

3、,目测比色，肉眼判断结果：显蓝色为阳㈩，无色为阴性㈠。1．3．2最后结果应用统计软件SPSS13.0进行分析。2结果2．114例溶血和不溶血乙型肝炎阳性结果完全一致。2．268例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原阴性结果完全一致。2．318例溶血雨不溶血乙型肝炎表面抗原结果不一致，出现假阳性。经二步法：从冰箱取出试剂盒室温放置30min。微孔的反映条件中各加入50μL待测液，并分阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照或阳性对照，各一滴，并设空白对照1孔，37℃避光孵育30min，弃空内液体、洗版5次拍干，每孔加酶结合物1滴（空白组除外），充分混匀，封板，然后在37℃避光孵

4、育30min本文档由www.yxt1101.com云轩亭论文网整理提供！，弃空内液体，洗版5次，拍干，加显色剂A和B各一滴，充分混匀，封板，然后在37℃避光孵育15min,目测比色并判断结果：HbsAg显蓝色为阳性，无色为阴性，结果均为阴性。结果经SPSS13.0分析，见表1：表1血液标本ELISA检测结果分析检测结果乙肝患者（人）健康人（人）溶血不溶血溶血不溶血阳性（﹢）1414180阴性（﹣）006886F--1284.44P--0．0002．4溶血对阴性标本检测易出现假阳性，阳性标本无影响。3讨论3．1引起溶血的常见原因及对策：采血时发生的溶血：1注射器和

5、容器不干燥，不清洁；2注射器与针头连接不好；3压脉带捆扎时间过长，淤血过久[3]；4抽血消毒时酒精未干就进行抽血；5穿刺不顺利损伤组织过多；6抽血速度过快针尖在静脉中探来探去；7血液注入容器中时未取下针头，或用力推出产生大量气泡；8在有血肿的地方采集血样；9渗透压的改变；10为了尽快分离血清，用竹签搅拌不当引起的溶血等；11用干燥管采血等。病人自身的因素；1病人自身有溶血性疾病；2由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血。弄清楚了溶血的常见原因，在临床上，我们就要积极的避免这些因素的发生，定位准确因素，对症下药，规范要求，熟练操作，避免人为因素

6、导致溶血的发生，从而使检测更加的准确。3．2溶血标本采用酶联免疫法（ELISA）检测乙型肝炎表面抗原易出现假阳性分析原因．可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素），能与聚乙烯孔内预包被的抗原或抗体结合，在洗涤过程难以完全洗脱；也可能是谷胱甘肽等过氧化物酶的作用，谷胱甘肽广泛存在于人体组织和细胞中，当溶血时，细胞内的过氧化物酶进入血浆，并大量吸附于细胞碎片及纤维蛋白原上，从而增加加样后微孔板洗涤的难度[4]，同辣根过氧化物酶作用相似，其可使过氧化氢释放出原生态氧，从而催化底物甲联苯胺生成可溶性物质显色，使乙型肝炎表面抗原易出现假阳性。由于

7、一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，使Ag本文档由www.yxt1101.com云轩亭论文网整理提供！产生假阳性。二步法首先将血清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微。温育过程中不会与酶结合物所含抗原与抗体结合，再经第二次洗涤，大大降低了残留的可能性，保证了结果的准确无误。3．3对待结果要严谨经过统计分析，见表1，我们可以看出，对于HbsAg阳性的标本检测溶血与不溶血的检测没有差别；对于健康者的检测，溶血与不溶血的检测，P<0.001,结果有统计学意义，说明两者间存在差异，这就要求我们的检验医师在对“健康者”的检测时，要慎重，出

8、现假阳性后，建议采用二步