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1、探析溶血对酶联免疫法检测乙肝表面抗原影响［摘要］目的：探讨溶血对乙型肝炎(乙肝)表面抗原测定的影响。方法：采用ELISA酶联免疫法测定乙肝表面抗原。结果：100例溶血标本中，76例标本乙肝表面抗原阴性，10例乙肝表面抗原假阳性，14例乙肝表面抗原阳性。结论：溶血影响乙型肝炎表面抗原阴性的测定结果，而对乙型肝炎表面抗原阳性无影响。［关键词］溶血；乙型肝炎；表面抗原；酶联免疫法［中图分类号］R373.2+1［文献标识码］C［文章编号11674-4721(2009)05(a)-160-01溶血是临床检验中最常见的一种干扰和影响因素。除常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破坏释放的某些胞内成分
2、也可干扰或影响临床检验结果的判定。乙型肝炎表面抗原的检测是诊断乙肝的主要指标，随着检验技术的不断发展，酶联免疫法因其简便，灵敏度高，特异性强，不需要特殊设备的特点，而被广泛应用。但是，由于各种原因造成的溶血，非特异性物质对试验造成影响，致使检验结果出现假阳性，现分析如下：1资料与方法1.1一般资料健康人体检，乙肝患者检查。1.2试剂乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（酶联免疫法），上海科华生物技术有限公司生产。1.3方法溶血血清制备，将待测血清放置于低温冰箱（-40°C）内冻结20min后，取出融化，以3000r/min离心10min,分离溶血血清。溶血和不溶血各1份。从冰箱取出试剂盒室温放置3
3、0min,微孔反应条中每孔加入待测标本50卩1,设阴阳性对照各2孔，每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。然后每孔加入酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀，封板，置371避光孵育30mino弃孔内液体，洗板5次后拍干。每孔加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，置37"避光孵育15min,目测比色，肉眼判断结果：显蓝色为阳性（+）,无色为阴性（-）o2结果①14例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原阳性结果完全一致。②10例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原阳性结果不一致，出现假阳性。经二步法：从冰箱取出试剂盒室温放置30min,微孔反应条中每孔加入待测标本50H1,设阴阳性对照各2孔，
4、每孔加入阴性对照（或阳性对照）各1滴，并设空白对照1孔。37£避光孵育30min,弃孔内液体、洗板5次拍干，每孔加酶结合物1滴（空白对照除外），充分混匀,封板，然后在371避光孵育30min,弃孔内液体，洗板5次拍干，加显色剂A和B各1滴，充分混匀，封板，37匸避光孵育15min,目测比色，肉眼判断结果：HBsAg显蓝色为阳性（+）,无色为阴性（-）,其结果均为阴性。③76例溶血和不溶血乙型肝炎表面抗原阴性结果完全一致。溶血对阴性标本检测易出现假阳性，阳性标本无影响。3讨论3.1避免使用溶血标本及溶血的原因①主要有体外溶血和体内溶血两种。体外溶血可由物理因素（如机械性破坏、冰冻）、化学因素（
5、如血样接触表面活性剂）和代谢性因素（如遗传病引起的血细胞脆性增加）引起。体内溶血则可由物理因素（人工心脏瓣膜或大血管手术后）、生物因素（如恶性疟疾）和药物毒性反应等因素引起。②采血过程中混入酒精、碘伏致使红细胞破坏引起的溶血。③由于病人严重脱水、低血容量休克等原因导致穿刺困难造成的溶血。④由于抽血器具质量不合格，如真空管负压不够或塑料试管质量较差导致的溶血。⑤用干燥管采血，为了尽快分离血清，用竹签搅拌不当引起的溶血等。为了排除溶血对临床检验的干扰和影响，要熟练操作，避免人为因素导致溶血的发生。3.2溶血标本采用酶联免疫法检测乙型肝炎表面抗原易出现假阳性，分析原因，可能是溶血血清中含有过氧化酶
6、物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)同辣根过氧化物酶作用相似，能与聚乙烯孔内预包被的抗原或抗体结合，在洗涤过程难以完全洗脱，其可使过氧化氢释放出原生态氧，从而催化底物甲联苯胺生成可溶性物质显色，使乙型肝炎表面抗原易出现假阳性。由于一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺显蓝色，使乙肝标志物HBsAg产生假阳性。二步法首先将血清洗掉，残留的过氧化物酶含量极微，温育过程中不会与酶结合物所含抗原与抗体结合，再经第二次洗涤，大大降低了残留的可能性，保证了结果的准确无误。3.3对待结果要严谨对于乙肝表面抗原阳性的溶血标本，其结果一定要慎重，做到准确无误，否则，会给患者带来
7、极大的痛苦，造成极大的经济和精神压力。［参考文献］［1］孙正伟，薛瑞贤，王键.酶联免疫法一步法检测乙肝表面抗原前带现象的初步探讨［J］.中华医学检验杂志,2003,2:25.［2］张小洁，刘建芝.真空采血标本溶血原因分析及预防措施［J］.护士进修杂志,2001,16(3):11.[3]李穗芬•标本溶血对乙肝表面抗原的影响[J].广州医药,2003,32(5):65.[4]许彬，朱虎定•酶联免疫法检测乙肝表面抗
