HPLC-DAD法测定鄂西北地区黄姜中薯蓣皂苷的含量.doc

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1、HPLC-DAD法测定鄂西北地区黄姜中薯蓣皂苷的含量【关键词】黄姜；薯蓣皂苷；含量测定黄姜为我国特有的薯蓣品种薯蓣科薯蓣属盾叶薯蓣（DioscoreaZingiberensisC.H.Wright）的根状茎。其性味甘、苦凉，具有清肺止咳、利湿通淋、通络止痛、解毒消肿的功能。黄姜的主要成分为甾体皂苷，根茎内薯蓣皂苷的成分对心肌缺血、胸痹、高脂血症等具有明显治疗作用[1]。我国人工栽培黄姜面积几万公顷，其中湖北鄂西北地区2万公顷，是国内栽植黄姜较早和比较集中的地区。目前多采用重量法、薄层扫描法、HPLC-ELSD法考察该类药材或制剂中总皂苷或皂苷元的含量，本文采用HPLC-

2、DAD法对黄姜药材中的薯蓣皂苷含量进行了测定，结果表明该方法准确可靠，重复性好，为更好的控制黄姜药材的内在质量提供了可靠的分析方法。1仪器与试药德国Dionex-U3000液相色谱仪（二极管阵列检测器，DionexChemeleon色谱工作站），薯蓣皂苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号111707-200501），甲醇（天津大茂色谱纯），D-101大孔树脂（天津海光化工有限公司）；水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。5份黄姜药材分别来自湖北省郧西、郧县、神农架、竹山、房县，经湖北中医学院药学院中药鉴定教研室詹亚华教授鉴定为薯蓣科薯蓣属盾叶薯蓣的根状茎。2方

3、法与结果2.1对照品溶液的制备取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成1.06mg/mL的溶液，即得。2.2供试品溶液的制备取黄姜药材粉末（过40目筛）约5g，精密称定,以30mL70%乙醇回流提取2次，每次1h，滤过，减压回收乙醇，以30mL水分次溶解，搅匀，静置后离心，吸取上清液上处理好的D101大孔树脂柱（2cm×15cm）。先用水洗脱至流出液无色，再以20%乙醇洗脱至无色，继而以70%乙醇洗脱，收集洗脱液约80mL，减压回收乙醇，蒸干后以流动相溶解并定容至25mL量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤后待用。2.3色谱条件[2]3采用Z

4、OBAXSBC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：甲醇水（31∶69）；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长206nm，在此色谱条件下薯蓣皂苷与相邻色谱峰的分离度良好，理论塔板数按薯蓣皂苷色谱峰计算为2100。2.4标准曲线与线性范围精密吸取“2.1”项对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别以甲醇定容至5mL量瓶中，摇匀，得到浓度分别为0.106、0.212、0.424、0.636、0.848、1.06mg·mL-1的薯蓣皂苷对照品溶液。各精密吸取10μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测

5、定峰面积，以薯蓣皂苷峰面积对浓度进行线性回归，得到回归方程：Y=2.1512X-1.2936，r=0.9998，表明薯蓣皂苷在0.106～1.06mg·mL-1范围内线性关系良好。2.5精密度试验吸取浓度为0.636mg·mL-1薯蓣皂苷对照品溶液10μL，按上述色谱条件，重复进样5次，其相对保留时间稳定，测得的平均峰面积值为8.082，计算RSD为1.18%。表明仪器精密度良好。2.6稳定性试验精密吸取“2.2”项下的供试品溶液10μL，分别在0、2、4、6、8、10h进样，测得的平均峰面积值为6.593,计算RSD为1.10%，表明处理后的供试品溶液在10h内稳定性

6、良好。2.7重复性试验称取同一批（产地：郧西）5份，每份约0.5g，精密称定。“2.2”项下平行制备供试品溶液，以外标两点法计算样品中薯蓣皂苷的平均含量为2.96mg·g-1，RSD为2.79%。2.8加样回收率试验精密称取已知含量的黄姜药材（含量2.96mg·g-1）6份，每份0.5g，分别精密加入薯蓣皂苷对照品1.48mg，按“2.2”项下的方法制备供试品溶液，用流动相定容于20mL量瓶中，摇匀后，进样10μl。测定回收率，结果见表1。表1加样回收率试验结果编号取样量(g)测得量（mg）原有含量（mg）加入量（mg）回收率（％）平均值（％）RSD（％）10.5122

7、2.98071.51611.4898.95220.50392.93781.49151.4897.72330.51173.01241.51461.48101.2498.591.7540.51082.94081.51201.4896.54550.50482.93451.49421.4897.32660.51032.98721.51051.4899.7832.9样品测定取不同产地采集的黄姜药材，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，每种药材平行3份溶液，在上述色谱条件下各进样10μl，以外标两点法计算样品中薯蓣皂苷的含量，色谱图见图1，含量测定结