反相高效液相色谱法测定胡芦巴中原薯蓣皂苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定胡芦巴中原薯蓣皂苷的含量作者：余淑娴，郭清峰，张纬，郑湘娟，郝晓霞，罗冬梅、【摘要】目的用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定胡芦巴中原薯蓣皂苷的含量。方法采用HPLC法，色谱柱为LichrospherC18(4.6mm×250mm,5μm)，流动相为乙腈水(8∶92,V/V)，检测波长为203nm。结果含量测定的线性范围为0.108～1.296μg，回收率为96.37%，RSD为1.78%(n=6)。结论该法简便，灵敏准确，可用于胡芦巴中原薯蓣皂苷的质量控制。【关键词】反相高效液相色谱；胡芦巴；原薯蓣皂苷　　Abstract：ObjectiveT

2、oestablishanRP-HPLCmethodforthedeterminationoftheprotodioscininTrigonellafoenum-graecumL..MethodsTheanalyticalcolumnm×250mm,5μm).Themobilephaseconsistedofacetonitrile-．ResultsThecalibrationcurveethodethodisreliableandaccurate,andcanbeusedforqualitycontrolofprotodioscininTrigonellafoenum-gra

3、ecumL.　　Key-graecumL.；Protodioscin　　胡芦巴为豆科植物胡芦巴属胡芦巴Trigonellafoenum-graecumL.的种子，在我国主产于贵州、江西、河北、安徽、四川、新疆等地，且南北各地均有栽培。干燥的胡芦巴种子有温肾、祛寒、止痛的功效，主治肾藏虚冷、小腹冷痛、小肠疝气、寒湿脚气等症［1］。胡芦巴的主要化学成分为甾体皂苷、黄酮及其苷、三萜、生物碱、香豆素、有机酸及油脂等，其中甾体皂苷是其主要成分［2］。原薯蓣皂苷（protodioscin）属于甾体皂苷，Hiroshige等［3］在胡芦巴中发现含有原薯蓣皂苷，该有效成分具有增强性功能﹑降血

4、脂、对癌细胞有毒杀和抗白血病等作用［4～7］。刘中博等［8］建立了HPLC法测定薯蓣属中原薯蓣皂苷的含量，但未见测定胡芦巴中原薯蓣皂苷含量的报道。　　本文首次建立了胡芦巴中测定原薯蓣皂苷含量的HPLC法，该方法以乙腈水(8∶92，V/V)流动相体系下在10min内完成了对胡芦巴中原薯蓣皂苷的分离和检测，同时样品预处理步骤少，操作简便实用，灵敏度高、选择性好。为胡芦巴和含胡芦巴类中成药的质量评价和控制提供了快速分离分析方法。　　1仪器与试药　　1.1仪器美国lab54紫外可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；KQ2200E型超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；RE-52AA型

5、旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；Sartorius十万分之一电子天平(德国)。　　1.2试药药材胡芦巴购自江西省药材公司(产地贵州省)，经江西医学院冯江教授鉴定为正品胡芦巴，原薯蓣皂苷对照品由中国药品生物制品检验所提供，乙腈为色谱纯，高纯水，其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件LichrospherC18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：乙腈水(8∶92，V/V)；柱温：30℃；流速：0.5ml/min；检测波长:203nm。在此色谱条件下,供试品色谱图中原薯蓣皂苷达到基线分离，其色谱峰保留时间与相应对照品一致，出峰时间恰当，见图1。　　图1

6、原薯蓣皂苷样品(a)和对照品(b)的HPLC图谱（略）　　2.2检测波长的确定用紫外可见分光光度计在200～450nm范围内扫描对照品溶液，由图2可见在203nm处有最大吸收，故以203nm作为测定原薯蓣皂苷含量的检测波长。　　2.3对照品溶液的制备精密称取于50℃干燥2h的原薯蓣皂苷对照品2.70mg，置于25ml容量瓶中，用流动相超声溶解，并定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液（0.108mg·ml-1）。　　2.4供试品溶液的制备准确称取过筛40目干燥至恒重的胡芦巴粉末0.50g，用正己烷进行索氏脱脂2h，脱脂后用75%的乙醇溶液30ml超声提取15min，过滤。重复两次超

7、声提取和过滤，滤液合并，滤液经减压蒸馏至干，浓缩液用流动相超声溶解，并定容于25ml容量瓶中，作为供试品溶液，经0.45μm滤膜滤过，进样10μl，按外标法定量分析，样品的色谱分离结果见图1(a)。　　2.5标准曲线和线性范围考察依次精密吸取对照品溶液1，2，4，6，10，12μl进样，记录峰面积，以峰面积值（Y）对原薯蓣皂苷的进样量（X）进行线性回归，得回归方程为Y=11582.93X-16.73，r=0.9999，检出限10ng（对进样10μl而言，S/N=3）。结果表明原薯蓣皂苷在0.108～1.