人参皂苷Rb1对体外培养雪旺细胞作用的实验研究.doc

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1、人参皂苷Rb1对体外培养雪旺细胞作用的实验研究作者：杨雷，刘黎军，肖建德，王大平，关瑞云【摘要】目的研究人参皂苷Rb1对体外培养雪旺细胞增殖分化的影响，探讨其促进神经再生的作用和机制。方法选用8个月月龄的新西兰兔的坐骨神经体外培养第2代，加入不同浓度的人参皂苷Rb1，继续培养10天，相差显微镜观察计数，绘制各自的增殖曲线；在36h和72h对各组细胞进行流式细胞分析。结果活细胞计数含20μg/ml人参皂苷Rb1组的倍增时间为5.3天，明显优于对照组(P＜0.01)；用含20μg/ml人参皂苷Rb1培养36h、72h后雪旺细胞增殖的流式细胞仪分析，处于S期的雪旺细胞较对照组明显增高(

2、P＜0.01)。结论人参皂苷Rb1有促进体外培养雪旺细胞快速增殖分化的作用，从而为促进神经损伤的再生途径提供一些新的药物使用基础研究。【关键词】人参皂苷Rb1；雪旺细胞；细胞增殖【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofGinsenosideRb1ontheproliferationanddifferentiationofSchwann’scellsanddiscussthemechanismofnerveregenerationinducedbyGinsenosideRb1.MethodsThesciaticnerveofNewzealandr

3、abbitof8monthsoldwasculturedinvitroandthesecondgenerationwasused.GinsenosideRb1withdifferentconcentrationsweredroppedintotheculturemediumfor10days.Numbersofcellswerecountedbycontrastmicroscopeandproliferationcurvesweredrawnindividually.Furthermore，analysisofcellsweremadebyflowcytometer.at36ha

4、nd72h.ResultsDoubleproliferationtimeofSchwann’scellsculturedin20μg/mlGinsenosideRb1was5.3dwhichsuperiortohaswasobviousdifferencefromthecontrolgroup(P＜0.01).ThenumbersofSchwannscellatsynthesisphasewereincreasedsignificantlywhichculturedin20μg/mlGinsenosideRb1(P＜0.01).ConclusionGinsenosideRb1ha

5、sthefunctionofstimulatingproliferationandidfferentiationofSchwann’scellinvitro，andsuqqeststheimportantroleinnerveregeneration.【Keywords】GinsenosideRb1；schwann’scell；proliferationanddifferentiationofandsuqqests4雪旺细胞是周围神经再生和周围神经组织工程研究的重要细胞，不仅为神经修复提供支撑，尚可诱导神经纤维生长的方向。近年来发现［1］尚有胶质细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、

6、霍乱毒素、血小板生长因子、转移生长因子以及cAMP类似物质等，均能刺激雪旺细胞生长，但是均有其局限性。应用中药治疗周围神经的损伤在临床上确有积极的疗效。为了解周围神经损伤后人参皂苷Rb1是否可以促使雪旺细胞增殖分化，从而促进周围神经损伤后的修复问题，我们设计了本实验研究。1材料与方法1.1药品与试剂人参皂苷Rb1购自长春白求恩医科大学基础医学实验室。DMEM培养液、0.25%胰蛋白酶(含1mmolEDTA-4Na)、胶原蛋白酶和新生小牛血清为美国Gibco公司产品，L-多聚赖氨酸(相对分子质量为15万～30万，Sigma公司)；兔抗鼠S-100蛋白酶联免疫细胞化学试剂盒(北京中山

7、生物公司)。1.2雪旺细胞的体外培养选用8个月月龄的新西兰兔1只，于静脉麻醉下在双侧坐骨神经中段用1-0号线结扎神经。术后7天在静脉麻醉下对结扎神经近、远端2.0cm的坐骨神经进行取材。取材后在解剖显微镜下仔细剥离神经外膜及其周围的粘连组织后，将神经剪成0.5mm3的小碎块后种植于培养皿中，加入适量培养液(80%的DMEM，20%的小牛血清)，待雪旺细胞长满培养皿后进行纯化传代。先将组织块移出至新的预留有培养液的培养瓶内做再次移植，继之顺序应用低浓度酶快速消化法、差速贴壁分离法和