人参皂苷Rb1对体外培养雪旺细胞作用实验探究.doc

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1、人参皂昔Rbl对体外培养雪旺细胞作用实验探究作者：杨雷，刘黎军，肖建德，王大平，关瑞云【摘要】目的研究人参皂昔Rbl对体外培养雪旺细胞增殖分化的影响，探讨其促进神经再生的作用和机制。方法选用8个月月龄的新西兰兔的坐骨神经体外培养第2代，加入不同浓度的人参皂昔Rbl,继续培养10天，相差显微镜观察计数，绘制各自的增殖曲线；在36h和72h对各组细胞进行流式细胞分析。结果活细胞计数含20Ug/ml人参皂昔Rbl组的倍增时间为5.3天，明显优于对照组(PV0.01)；用含20Ug/ml人参皂昔Rbl培养36h、72h后雪旺细胞增殖的流式细胞仪分析，处于s期的雪旺细胞

2、较对照组明显增高(pv0.01)o结论人参皂昔Rbl有促进体外培养雪旺细胞快速增殖分化的作用，从而为促进神经损伤的再生途径提供一些新的药物使用基础研究。【关键词】人参皂昔Rbl；雪旺细胞；细胞增殖【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofGinsenosideRblontheproliferationanddifferentiationofSchwann'scellsanddiscussthemechanismofnerveregenerationinducedbyGinsenosideRbl・MethodsThesciati

3、cnerveofNewZealandrabbitof8monthsoldwasculturedinvitroandthesecondgenerationwasused.GinsenosideRblwithdifferentconcentTationsweredroppedintotheculturemediumfor10days・Numbersofcellswerecountedbycontrastmicroscopeandproliferationcurvesweredrawnindividually.Furthermore,analysisofcellsw

4、eremadebyflowcytometer.at36hand72h.ResultsDoubleproliferationtimeofSchwann?scellsculturedin20iig/mlGinsenosideRblwas5.3dwhichsuperiortohaswasobviousdifferencefromthecontrolgroup(P<0・01).ThenumbersofSchwannscellatsynthesisphasewereincreasedsignificantlywhichculturedin20Pg/mlGinsenosi

5、deRbl(P<0.01).ConclusionGinsenosideRblhasthefunctionofstimulatingproliferationandidfferentiationofSchwann?scellinvitro,andsuqqeststheimportantroleinnerveregeneration.[Keywords]GinsenosideRbl；schwann?scell；proliferationanddifferentiationofandsuqqests雪旺细胞是周围神经再生和周围神经组织工程研究的重要细胞，不仅为神经修

6、复提供支撑，尚可诱导神经纤维生长的方向。近年来发现［1］尚有胶质细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、霍乱毒素、血小板生长因子、转移生长因子以及cAMP类似物质等，均能刺激雪旺细胞生长，但是均有其局限性。应用中药治疗周围神经的损伤在临床上确有积极的疗效。为了解周围神经损伤后人参皂昔Rbl是否可以促使雪旺细胞增殖分化，从而促进周围神经损伤后的修复问题，我们设计了本实验研究。1材料与方法1.1药品与试剂人参皂昔Rbl购自长春白求恩医科大学基础医学实验室。DMEM培养液、0.25%胰蛋白酶（含lmmolEDTA-4Na）.胶原蛋白酶和新生小牛血清为美国Gibco公司产品

7、，L-多聚赖氨酸（相对分子质量为15万〜30万，Sigma公司）；兔抗鼠S-100蛋白酶联免疫细胞化学试剂盒（北京中山生物公司）。1.2雪旺细胞的体外培养选用8个月月龄的新西兰兔1只，于静脉麻醉下在双侧坐骨神经中段用1-0号线结扎神经。术后7天在静脉麻醉下对结扎神经近、远端2.Ocm的坐骨神经进行取材。取材后在解剖显微镜下仔细剥离神经外膜及其周围的粘连组织后，将神经剪成0.5mm3的小碎块后种植于培养皿中，加入适量培养液（80%的DMEM,20%的小牛血清），待雪旺细胞长满培养皿后进行纯化传代。先将组织块移出至新的预留有培养液的培养瓶内做再次移植，继之顺序应用

8、低浓度酶快速消化法、差速贴壁分离法和抗