Pyk2调控牙龈卟啉单胞菌内化及牙龈上皮细胞自噬的研究

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1、分类号：R781.4单位代码：10159密级：公开学号：201521157硕士学位论文（口腔基础医学硕士学术学位）中文题目：Pyk2调控牙龈卟啉单胞菌内化及牙龈上皮细胞自噬的研究英文题目：Pyk2RegulatedPorphyromonasgingivalisInternalizationandAutophagyofGingivalEpithelialCells论文作者：武茜茗指导教师：寇育荣副教授学科专业：口腔基础医学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文Pyk2调控牙龈卟啉单胞菌内化及牙龈上皮细胞自噬的研究Pyk2R

2、egulatedPorphyromonasgingivalisInternalizationandAutophagyofGingivalEpithelialCells论文作者武茜茗指导教师寇育荣副教授申请学位医学硕士培养单位口腔医学院一级学科口腔医学二级学科口腔基础医学研究方向口腔生物学论文起止时间2015年11月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月中国医科大学硕士学位论文摘要目的：牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis），作为慢性牙周炎的主要致病菌，具有侵入牙龈上皮

3、细胞并长期存活的能力。前期研究表明，富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（protein-richtyrosinekinase2,Pyk2）在P.gingivalis感染过程中发生活化。本课题通过对P.gingivalis感染牙龈上皮细胞过程中细胞自噬相关分子表达的研究，探讨Pyk2在牙龈上皮细胞自噬过程中的作用及其对P.gingivalis内化的影响，旨在揭示该菌的致病机理，为慢性牙周炎的防治提供新的靶点和思路。材料方法：建立P.gingivalis感染人类永生化牙龈上皮细胞epi4细胞模型（MOI100:1），通过透射电镜下观察自噬囊泡及

4、细菌内化情况；免疫荧光法观察自噬小体；Real-timePCR法检测LC3ⅡmRNA水平；Westernblot法检测LC3Ⅱ、P62蛋白质水平。以特异性Pyk2抑制剂TAE226预处理细胞后进行P.gingivalis感染实验，Westernblot法检测LC3Ⅱ蛋白质水平，抗生素保护法检测P.gingivalis的内化效率。结果：1、P.gingivalis感染epi4细胞后，细胞内可观察到大量双层膜结构自噬囊泡，也可见有菌体存在于囊泡中；2、免疫荧光显示P.gingivalis感染epi4细胞后，细胞内可观察到大量自噬小体；

5、3、自噬相关分子LC3ⅡmRNA的表达水平随时间上调，在6h达到峰值（P<0.05）；4、自噬标记蛋白LC3Ⅱ的蛋白表达量随时间上调（P<0.05）；P62的蛋白表达量则随时间下调（P<0.05）；5、TAE226预处理后LC3Ⅱ的蛋白表达量显著下调（P<0.05）；6、TAE226预处理后P.gingivalis对epi4细胞的内化显著减弱（P<0.05）。结论：1、P.gingivalis感染牙龈上皮细胞的过程，增强牙龈上皮细胞自噬并实现P.gingivalis内化；2、P.gingivalis感染能够通过Pyk2的表达影响P

6、.gingivalis内化；3、P.gingivalis感染能够通过Pyk2的表达调控细胞自噬。关键词：P.gingivalis；牙龈上皮细胞；Pyk2；自噬；内化课题资助：国家自然科学基金（No.81300886）。I中国医科大学硕士学位论文AbstractObjectives:Porphyromonasgingivalis,whichisthemainpathogenofchronicperiodontitis,canbeinternalizedinandchronicallypersistingingivalepitheli

7、alcellsonthesurfaceofperiodontaltissue.Protein-richtyrosinekinase2(Pyk2)wasfoundtogetinvolvedintheinfectioninpreviousstudy.Inthisstudy,theexpressionofautophagy-relatedmoleculesofgingivalepithelialcellsintheprocessofP.gingivalisinfectionwasinvestigatedandtheeffectofPyk

8、2onP.gingivalisinternalizationandtheautophagyofgingivalepithelialcellsinducedwasfurtherexplored.Theaimsofthisstudyaretoeluci