SNT0177-2011出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜０１７７—２０１１代替ＳＮ０１７７—１９９２出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法犕犲狋犺狅犱犳狅狉犲狀狌犿犲狉犪狋犻狅狀狅犳犮犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狆犲狉犳狉犻狀犵犲狀狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犲狓狆狅狉狋２０１１０９０９发布２０１２０４０１实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜０１７７—２０１１前言本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ０１７７—１９９２《出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌检验方法》。本标准与ＳＮ０１７７—１９９２相比，主要技术变化如下：

2、———变更为推荐性标准；———检测方法部分参考了ＩＳＯ７９３７：２００４《食品和动物饲料微生物产气荚膜梭状芽孢杆菌计数菌落计数技术》内容，在标准中增加乳糖亚硫酸盐试验作为确证试验，减除了含卵黄的ＴＳＣ琼脂和ＰＹ培养基的使用；———补充了商品化的全自动微生物鉴定仪。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局。本标准主要起草人：顾鸣、韩伟、谢小珏、王赢、陈立。Ⅰ犛犖／犜０１７７—２０１１出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌计数方法１范围本标准规定了出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌（犆犾狅狊狋狉犻

3、犱犻狌犿狆犲狉犳狉犻狀犵犲狀狊）的计数检验方法。本标准适用于出口食品中产气荚膜梭状芽孢杆菌的检验。２规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２分析实验室用水规格和试验方法ＳＮ／Ｔ１５３８．１培养基制备指南第１部分：实验室培养基制备质量保证通则ＳＮ／Ｔ１５３８．２培养基制备指南第２部分：培养基性能测试实用指南３术语和定义下列术语和定义适用于本文件。３．１产气荚膜梭状芽孢杆菌犮犾狅狊狋狉犻犱犻狌犿狆犲

4、狉犳狉犻狀犵犲狀狊在特定的选择性培养基上，细菌菌落生长呈现黑色特点（亚硫酸盐降解为硫化物而形成黑色沉淀物，并使菌落呈现黑色），分解乳糖产酸产气，４８ｈ内能液化明胶的细菌。４设备和材料４．１无菌吸管：１．０ｍＬ和１０．０ｍＬ，分刻度分别为０．１ｍＬ和１．０ｍＬ。４．２无菌培养皿：直径９０ｍｍ。４．３均质器及均质袋（或均质杯）。４．４恒温培养箱或厌氧培养箱：３７℃±０．５℃。４．５恒温水浴锅：４６℃±０．５℃。４．６厌氧发生装置。４．７放大镜和（或）菌落计数器。４．８光学显微镜１０×～１００×。４．９冰箱：２℃～８℃。４．１０天平：感量０．１

5、ｇ。１）。４．１１全自动微生物鉴定系统ＶＩＴＥＫｃｏｍｐａｃｔ１）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。１犛犖／犜０１７７—２０１１５培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为ＧＢ／Ｔ６６８２规定的分析实验室用水。５．１亚硫酸盐环丝氨酸琼脂（ＳＣ）：见Ａ．１。５．２液体硫乙醇酸盐培养基：见Ａ．２。５．３乳糖亚硫酸盐培养基（ＬＳ）：见Ａ．３。５．４缓冲动力硝酸盐培养基：见Ａ．４。５．５亚硝酸盐检测试剂：见Ａ．５

6、。５．６锌粉。５．７乳糖明胶培养基：见Ａ．６。５．８蛋白胨水：见Ａ．７。２）。５．９ＶＩＴＥＫ２ＡＮＩ生化鉴定卡６检验程序产气荚膜梭状芽孢杆菌检验程序见图１。图１产气荚膜梭状芽孢杆菌的检验程序２）由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。２犛犖／犜０１７７—２０１１７操作步骤７．１样品的稀释７．１．１无菌操作称取检样２５ｇ（ｍＬ）放入无菌均质器或均质袋中，加入２２５ｍＬ蛋白胨水，均质，制成１∶１０样品匀液。７．１．２吸取１

7、∶１０样品匀液１ｍＬ，加入到９ｍＬ蛋白胨水中，混合均匀，制成１∶１００样品匀液。必要时，按此法将样品作进一步的１０倍递增稀释。７．２接种与培养７．２．１选择２个～３个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），每个稀释度分别吸取１ｍＬ样品匀液加入到两个无菌平皿内。７．２．２将１０ｍＬ～１５ｍＬ维持在４４℃～４７℃的ＳＣ琼脂倾注平皿，转动平皿使其混合均匀。待培养基凝固后，再覆盖上１０ｍＬＳＣ琼脂，待其完全凝固。７．２．３翻转平板，放入厌氧罐或其他适宜容器中，厌氧环境下３７℃±０．５℃下培养２０ｈ±２ｈ。培养时间过长可能会导致平板颜色过黑。７

8、．３平板计数７．３．１选取菌落数＜１５０ＣＦＵ的平板，计数每个平板上的黑色菌落数，记录稀释倍数。７．３．２每个平板挑取５个典型或可疑菌落（小于５个时应全部挑选）进行确证。７．４乳糖亚硫酸盐试