梭状芽孢杆菌属的鉴定

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1、梭状芽抱杆菌属的鉴定专业：12检验3()1组别：第七组学号：121132103612113210181211321042姓名：谢宝彬李强强王嬪一、实验目的掌握破伤风梭菌和产气荚膨梭菌检验方法和鉴定要点二、实验内容破伤风梭菌和产气荚膜梭菌的分离培养及菌落特点、形态染色特点观察。三、分离培养及菌落形状观察将破伤风梭菌和产气荚膜梭菌接种于血平板、卵黄平板，疱肉培养基、紫牛乳培养基置于35度温箱培养，经18〜24小时。结果如下：卵黄平板血平板疱肉培养基紫牛乳培养基破伤风梭菌未有单个菌落，黄色，边缘整齐，凸起，光

2、滑，湿润，不透明l-2mm,圆形隆起，湿润，灰白色，半透明、呈薄膜状生长，边缘疏松似羽毛状伴B溶血肉渣部分消化，微变黑，产生少量气体，有腐败性恶臭无明显变化产气荚膜梭菌l-3mm,乳口色，圆形，湿润，光滑，不透明,边缘出现乳白色浑浊圈未有单个菌落，乳口色，圆形，隆起，边缘整齐，光滑，湿润，不透明产生大量气体，肉渣不被消化产生少量气休、基本无明显变化破伤风梭菌于BAP产气荚膜梭菌于BAP破伤风梭菌丁•卵黄平板产气荚膜梭菌了卵黄平板结果分析破伤风梭菌在血平板上呈薄膜装生长，此菌在血平板出现透明溶血环是由于此

3、菌产生溶血毒索导致红细胞溶解。破伤风梭菌在疱肉培养基，肉渣部分消化，微变黑，产牛少量气体，有腐败性恶臭。产气荚膜梭菌有双层溶血坏，称为靶样溶血。内坏是由0壽素引起的完全溶血；外环是由G毒素引起的不完全溶血。此菌在卵黄平板上，能产生卵磷脂解，分解卵黄中的卵磷脂，导致菌落周闌出现乳白色浑浊圈。若在培养基中加入Cl毒索的抗血清，则不出现混浊，该现象称为Nagler反应。在疱肉培养基中生长迅速，产生大量气体，肉渣不被消化，但变为粉红色。在牛乳培养基中，能分解乳糖产酸，使酪蛋H凝固，同时产生人量的气体将凝固的酪蛋

4、白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林向上推挤，甚至冲开木塞，称为“汹涌发酵”现象。四、细菌染色1、分别挑取破伤风梭菌、产气荚膜梭菌接种于卵黃平板上的适量于玻片做菌悬液，干燥,固定。进行革兰染色、芽砲染色。结果如下：革兰染色：结晶紫（1分钟、水洗）->碘液（1分钟、水洗）-95%乙醇（30秒、水洗）->稀释复红（30秒、水洗）->滤纸吸干->镜检10x100产气荚膜梭菌10x100破伤风梭菌2、芽范染色：碳酸复红（冷染8分钟,水洗）-95%酒精（30秒，水洗）-美兰（1分钟、水洗）->滤纸吸干->镜检10x1

5、00产气荚膜梭菌10x100破伤风梭菌结果：菌体为蓝色，芽他为红色。结果分析：1、革兰阳性菌细胞壁较密集，肽聚糖层厚，外膜、脂蛋白、脂多糖均含有人量脂质，容易被乙醇脱色致使细胞壁通透性増髙，细胞内的结晶紫一碘复合物不易被乙醇溶解提出而脱色•，出用稀释复红吋细菌便被染成紫色。2、破伤风荚膜梭菌无荚膜，周鞭毛。芽葩呈正圆形，宽于菌体，位于菌体顶端，细菌呈鼓槌状。初期培养物为革兰氏阳性；培养24h后，尤其是芽孑包形成后，细菌易转为革兰氏阴性。3、产气荚膜梭菌革兰氏阳性粗大杆菌，芽砲呈椭圆形，直径小于菌体，位于

6、次极端，无鞭毛。4、芽殖染色，芽抱壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，复染液染色后，芽殖仍然保留初染剂的颜色，故为红色。5、可由于制片不当或芽胞以脱落，使得染色后芽胞少见。五、生化反应将破伤风梭菌和产气荚膜梭菌接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、山露醇微量生化管中置于35度温箱培养，经24小时。结果如下：产气荚膜梭菌破伤风梭菌葡萄糖乳糖麦芽糖蔗糖甘露醇破伤风梭菌—————产气荚膜梭菌————+结果分析产气荚膜梭菌发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，产酸产气。由于接种菌量不足，或者是接种针冷却不够，导致葡

7、萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖结果阴性。麦芽糖一般不发酵糖类。六、药敏试验厌氧菌对青每素G、四环素、红霉素、氯霉素、甲硝畔、林可霉素等药物敏感。