大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用

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1、维普资讯http://www.cqvip.com浙江中医杂志2006年旦箜堂【实验研究】大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用何煜舟丁美萍浙江大学医学院附属第二医院浙江杭州310006摘要目的：探讨大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用。方法：体外培养内皮细胞，将细胞分为7组，即空白对照组(contro1)、溶剂对照组(DMSO)、氧化损伤组(Hz02)、氧化损伤加入槲皮素对照组(Quercetin+H202)、氧化损伤加入大豆异黄酮低、中、高浓度组(Isonavone—L+H202、lsoflavone-M+H20

2、2、Isoflavone-H+H2o2)。将750ymol／LH202作用于加入槲皮素及不同浓度大豆异黄酮预培养24小时的内皮细胞，继续培养l8小时，以一氧化氟(N0)、丙二醛(MDA)、SOD、GSH—PX、流式细胞凋亡率为检测指标。结果：大豆异黄酮呈剂量依赖性降低H02对抗氧化酶SOD、(H—PX的活力的影响，降低MDA量，增加培养液中N02一／N~一含量，并显著减少细胞凋亡数量，各指标差异有显著性(P<0．01)。结论：大豆异黄酮可保护和修复过氧化氢诱导的血管内皮细胞的损伤，其作用可能与抗氧化、促进N0释放，增强抗氧化酶S

3、OD、GSH-PX的活力有关。关键词过氧化氢大豆异黄酮内皮细胞凋亡动脉粥样硬化近年来，内皮细胞凋亡在动脉粥样硬化发生和发展1．2实验方法：分如下几步进行。中的作用正逐渐成为研究的热点，而抗内皮细胞凋亡、1．2．1血管内皮细胞培养：取新生未进食小牛胸主动保护内皮细胞有望成为防治以血管硬化为基础的心脑血脉20cm左右，用D—Hank’s液清洗干净，剥去血管外管疾病一种新的、有效的方法因此寻找和开发保护内结缔组织，结扎分支血管，结扎近心端，外翻，将远心皮细胞，抑制内皮细胞凋亡或死亡的药物，为临床开辟端结扎，在0．25胰酶中消化l0分钟

4、，离心1000r／了新的治疗思路，具有十分重要的临床意义。大豆是一min，5分钟后收集内皮细胞，用含209，6胎牛血清的种药食兼用的佳品，据《中药大辞典》记载，大豆性味DMEM液培养基，37℃下置于59，6培养箱中培养，在倒甘平，人脾、肾经能活血、利水、祛风、解毒、治水置显微镜下，细胞呈多角形单层铺路石样排列，形态学肿胀满、风毒脚气、黄疸浮肿、风痹筋挛、产后风痉、鉴定为血管内皮细胞。待长成致密单层后传代。El噤、痈肿疮毒，解药毒。大豆异黄酮是一种植物雌激1．2．2H02及大豆异黄酮处理：细胞传代铺于24孔素，系由大豆及黑豆等豆类

5、植物中提炼而出，对人体健板中，待生长至单层融合，H。02损伤组加入750／1mol／康十分有益。它具有明显的清除自由基和抗氧化作用。LH02刺激18个小时，给药组在H02刺激前，细胞过氧化氢(H)是主要的活性氧，它可诱导内皮细胞分别与1、10、100／~mol／L的大豆异黄酮预培养24小凋亡，甚至死亡。本实验用体外细胞培养方法，采用过时，另设槲皮紊(30ymol／L)阳性药物对照组、溶剂氧化氢诱导血管内皮细胞损伤模型，研究大豆异黄酮对对照组和正常组。所有的实验至少重复3次。内皮细胞损伤的过氧化脂质生成、一氧化氮、抗氧化酶1．2．

6、3NO量的测定：细胞接种于24孔板，分组及S0D与GSH—PX的活力及细胞凋亡的影响。处理方法同上。一氧化氮(NO)测定：用No卜／I材料与方法No含量表示N0生成量，Griess试剂测定。取各组1．1主要材料：大豆异黄酮购自上海黄山制药厂，培养液100t~l，加入等量的Griess试剂，室温避光15用DMS0(上海生物工程有限公司生产)溶解后避光分钟后，ELX750酶标仪于550nm处测定A值，以亚保存备用，A0、EB为Fluca公司产品，DMEM培养硝酸钠作标准曲线计算No卜量表示NO的量。基、胰蛋白酶为GIBCO公司产品，

7、槲皮素购自SIG—1．2．4MDA测定；细胞接种于24孔板，如上所述，MA公司，小牛血清购自杭州四季青生物工程有限公分组及处理方法同上。收集各组上清液，按试剂盒所司，MDA试剂盒、S0D、GSH—PX试剂盒购自南京述方法测定各组MDA含量。建成生物工程公司，HO(30，AR级)购自浙江1．2．5细胞SOD、GSH—PX活力测定：细胞接种临安化工工厂，临用时稀释，并在5分钟内使用。于24孔板，分组及处理方法同上。取100~1各组细胞维普资讯http://www.cqvip.com逝史堕志2006年4月第41卷第4期上清液，按试剂盒

8、所述方法测定。细胞的粘附和损伤，调节血管张力等作用。有实验表明1．2．6流式细胞仪分析：处理方法、分组同上。将NO活性的恢复能导致内膜损伤的消退。本实验证明大细胞制成单细胞悬液，收集1×l0。个细胞，经冷PBS豆异黄酮随浓度促进H02降低的NO水平升高，提示洗2