复方丹参注射液对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用

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1、复方丹参注射液对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用作者：任香善，宋京郁，林贞花，任香玉，高英兰，金贤国［摘要］［目的］探讨复方丹参注射液对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制.［方法］用过氧化氢损伤内皮细胞，MTT法检测其存活率，分光光度法检测细胞培养上清液中的MDA含量，免疫细胞化学染色法检测细胞表面细胞间ICAM-1的表达.［结果］血管内皮细胞受到氧化损伤后，细胞存活率明显降低，MDA含量明显增加，细胞间ICAM-1表达明显增加，而预先加入复方丹参注射液可改善上述结果.［结论］复方丹参注射液通过其抗脂质过氧化作用，对氧化损伤

2、的血管内皮细胞具有保护作用.［关键词］内皮，血管;创伤和损伤;丹参;丙二醛ABSTRACT:OBJECTIVEToexploretheprotectiveeffectsofthepoundDansheninjectiononthevascularendothelialcells（VECs）injuredbyoxidizationanditsmechanismsofanti-oxidization.METHODSByusingprimarycultureofnebilicalvEinendothelialcells（UVECs）

3、invitro，theUVECseasuredbyMethylthiazoiyltetrazolium（MTT）assay.ThecontentsofMDAinthesuspensionofcellcultureeter，andtheexpressionofintercellularadhesionmolecule-1（ICAM-1）munocytochemistry.RESULTSAfterVECsenoncouldbepreventedinsomedegreethroughaddingthepoundDansheninje

4、ctioninadvance.CONCLUSIONThepoundDansheninjectionhasprotectiveeffectsontheinjuredendothelialcellsinducedbyoxidizationthroughthefunctionofanti-lipidoxidization.Key，vascular;alondialdehyde动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是引发多种心脑血管疾病的直接病因，而许多研究结果表明血管内皮细胞（endothelialcell，EC）损伤

5、又是AS发生的始动环节［1］.本实验采用过氧化氢制作血管内皮细胞氧化损伤模型后利用复方丹参注射液进行干预，以探讨复方丹参注射液的主要成分丹参对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其机制.1材料与方法1.1材料复方丹参注射液（含丹参1g/mL）为上海中西药液股份有限公司产品，批号为021001;M199培养基为美国GIBCO公司产品;胎牛血清为美国HYCOLONE公司产品;过氧化氢（300mL/L，AR级）为天津开发区海晶精细化工厂产品，临用前稀释，并在5min内使用;MTT为SIGMA公司产品;MDA试剂盒由北京邦定生物技术有限公

6、司提供;细胞间ICAM-1多克隆抗体由武汉博士德公司提供;ABC试剂盒为美国产品.　1.2方法1.2.1人脐静脉内皮细胞的培养及分组参照1.2.4免疫细胞化学染色检测细胞间ICAM-1在无菌条件下制备2×108个/L血管内皮细胞细胞悬液，并将其接种于12个25mL培养瓶内，细胞处理同1.2.2项下方法，收集细胞，取细胞悬液均匀涂布于20mm×20mm载玻片上，使每涂片细胞数达到约1×104个，室温晾干，冷丙酮固定10min.各组EC涂片的免疫细胞化学染色方法按照ABC试剂盒说明书进行.ICAM-1判定标准为光学显微镜下细胞膜或

7、细胞浆呈棕黄色为阳性;细胞核及细胞浆均无着色为阴性.结果分别用阳性细胞数比例和深度积分评分法进行计算［4］.1）每高倍镜视野下阳性细胞数比例:阳性细胞数得0%～5%为0分，6%～25%得1分，26%～50%得2分，高于50%得3分;2）每高倍镜视野下细胞染色深度:深棕黄色得1分，深褐色得3分，介于两者之间者得2分.用两项指标的乘积，代表各自的表达程度，每标本随机选取3个统计场，每组选取5个标本，取其平均值作为阳性表达率.阳性表达率按阳性细胞与总细胞数之比的计算公式计算.免疫细胞化学染色中以PBS代替1抗作为阴性对照，大鼠的血管

8、作为阳性对照.1.2.5统计学处理用SPSS10.0统计软件进行分析，所有数据以均数±标准偏差（x±SD）表示，进行方差分析.2结果2.1MTT法检测模型组经MTT法检测其OD值为0.088±0.005，正常组为0.228±0.009，可见模型组明显下降，两组间比较有显著性差