草本刺嫩芽多糖的提取纯化及其性质研究

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1、沈阳农业大学硕士学位论文草本刺嫩芽多糖的提取纯化及其性质研究姓名：王悦申请学位级别：硕士专业：生物化学与分子生物学指导教师：李秉超20070601独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得沈阳农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：jL，恢J导师签名：耖荔也ad’一时间：．20'o'7时间：2∞7年6日f踮辱f其lgi3关于论文使用授

2、权的说明本人完全了解沈阳农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意沈阳农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：三，I刺导师签名：鸯氢也时间：山口7年／月／8日时间：2即7年厂月／g日沈阳农业大学硕士学位论文草本剌嫩芽多糖的提取纯化及其性质研究摘要研究生：王悦导师：李秉超草本刺嫩芽(Araliacontinentalis．kitag)为五加科多年生草本植物，学名：长白搀木，又名东北土当归、土当归、

3、舌秸颗、狗苦龙芽、牛尾大活等，其嫩芽是著名的营养丰富的名贵珍稀食用山野菜，野生草本刺嫩芽多生于针阔混交林、杂木林、山坡灌丛问。草本刺嫩芽的根、叶、花含挥发油，其中根含296，叶含0．58％：叶和茎含有黄酮、香豆素，根、茎含有皂甙：茎皮含有单宁：根还含有淀粉19．4％，可溶糖1．69％等：果实含有嘌呤等。根及根皮入药，味辛，苦，性温，无毒，主治风湿性关节炎、腰肌劳损等病。(刘兴权，2001)本实验用热水浸提、酶法处理、再经醇析、Sevage法除蛋白，水相透析得到半精品多糖。脱蛋白后的半精品多糖先经DEAE-纤维素柱层析洗脱，得到脱色的精品多糖，再经SephadexG．200葡聚糖

4、凝胶柱层析洗脱后，得到四种分子量均一的纯多糖，并根据提取部位不同分别命名为：根(sub—G№a)、茎(sub—Jtoo)茎(sub．JNaa)、叶(sub．Y№a)。应用红外光谱和高效液相色谱分析其组成成分，采用物理化学分析方法验证其理化性质，并证实了草本刺嫩芽多糖具有抑菌作用和抑制lhNase的生物学活性。本实验的主要结论如下：1．采用水提醇沉法提取粗多糖，正交实验得出最佳提取条件为：料液比1：24，温度90℃，时间2h，提取次数2次，此条件下粗多糖含量为3．76％。2．采用酶法配合水提醇沉法提取草本刺嫩芽粗多糖：本实验应用纤维素酶液处理脱脂后的草本刺嫩芽全株干粉，发现当酶浓

5、度达到7％，温度达到50℃，时间为60min，pH为5．0时，多糖含量可达到4．32％，要比常规法得率高出15％。3．所提根、茎、叶三部分粗多糖的蛋白质含量分别为：根中蛋白质含量为37．56mg／吨，茎中蛋白质含量为55．?3mg／mL，叶中蛋白质含量为16．61mg／mL。物化性质表明，草本刺嫩芽多糖为水溶性的无味粉末。斐林试剂反应，糖醛酸检测和Seliwanoff反应均显阳性，碘二碘酸钾反应中只有根多糖显阳性。4．将三部分脱蛋白多糖进行DEAE一纤维素柱层析，每部分分别用蒸馏水、0．2mol／LNaCl和0．5mol／L的Na0H洗脱，得到的九种级分可作为SephadexG

6、-200样液。经SephadexG一200进一步纯化，得到含量较多，峰形均一对称的四种亚级分：根(GN,O)、茎(Jmo)、茎(Jnaa)、叶(YNaO)，通过SephadexC,．-200凝胶过滤法和醋酸纤维薄膜电泳法进行纯度鉴定，证明为均一多糖。5．红外光谱分析显示四种纯多糖不含硫酸基团和乙酰基，具备B一糖苷键以及糖类特征吸收峰。HPLE分析得出：根的Nacl洗脱多糖组分为D一半乳糖醛酸、D一果糖、D一葡萄糖，茎的水洗脱液多糖组分为D一甘露糖、D一半乳糖醛酸，茎的NaCl洗脱多糖组分D一葡萄糖、D一半乳糖，叶的洗脱多糖组分为D一半乳糖醛酸和D一山梨糖。草本刺嫩芽多糖的提取纯

7、化及其性质研究摘要6．三部位多糖的性质研究：抑菌试验显示草本刺嫩芽多糖对青霉菌具有抑制作用；多糖对核糖核酸酶的抑制作用实验表明，草本刺嫩芽的叶多糖成分可以较显著的抑制核糖核酸酶的活性。关键词：草本刺嫩芽，多糖，分离纯化，结构分析，性质沈阳农业大学硕士学位论文AbstractAra／／acontmentalis．kitagisnutritionsAraliaoeaeperennialherbageands础wncI岵It’sroot,stemandleafhavevolatileoil,the