一种胶原蛋白寡肽体外透皮吸收性能研究

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1、第203101卷年第3N1期成都大学学报(自然科学版)Vl0l-3ONo．1JournalofChengduUniversity(NaturalScienceEdition)Mar．2O11文章编号：1004—5422(2011)01—0008—03一种胶原蛋白寡肽体外透皮吸收性能研究宋芹，陈封政，颜军，郭晓强，邬晓勇，苟小军(成都大学中药化学实验室，四川成都610106)摘要：为研究胶原蛋白寡肽的体外透皮吸收性能，采用体外透皮实验模型考察胶原蛋白寡肽(平均分子量920Da，其中寡肽约占50％，三肽约占12％)对小鼠皮肤的透

2、皮吸收性．结果表明，胶原寡肽24h的累积渗透量为1160．3cII】2，体外渗透过程符合零级动力学方程，Q=41．574t+164．58，r=0．997，表现出良好的透皮吸收性能．关键词i胶原蛋白；寡肽；透皮吸收中图分类号：TS59文献标识码：A(和光纯药工业株式会社，LotWAGT059)，三氯乙酸、O引言羟脯氨酸、氯胺T、柠檬酸、氢氧化钠、醋酸钠、正丙胶原蛋白(Collagen)称胶原，是真皮的主要组醇、对二甲氨基苯甲高氯酸、异丙醇、硫酸等试剂均成成分．由于胶原蛋白分子是由3条多肽链构成3为分析纯．·股螺旋结构的蛋白质，

3、能维持皮肤张力和弹性，且分1．2仪器子中含有大量的酰胺基团和羟基，具有较强的吸湿实验所用仪器包括：LC。9AshimaDZU／C．R7A高性，从而使皮肤保持饱满充盈

4、1]．随着人们年龄的效液相色谱仪(日本岛津公司)，uV一1601型紫外分增长，真皮内的胶原发生降解和老化，皮肤变得干燥光光度计(日本岛津公司)，METIZER—AE100型电子并出现皱纹．为防止皮肤衰老，有学者研究通过补充天平(瑞士METII,ER公司)，恒温磁力搅拌器、单室胶原蛋白来达到延缓皮肤衰老的进程，但由于胶原扩散池、日立L-8800型氨基酸分析仪(日本

5、日立株蛋白分子量较大，无法实现透皮吸收．因此，人们开式会社)，离子交换树脂柱4．6mlTl×60mm，2622SC始利用生物酶技术将胶原蛋白水解成胶原寡肽或者型(日本日立株式会社)．氨基酸4J，因其分子量小，与人体皮肤胶原结构相2方法与结果似，并具有良好的生物相容性，因而被广泛用作化妆品的原料或添加剂b]．本研究拟采用酶法提取胶原2．1胶原蛋白寡肽(CollagenPeptid，CP)制备蛋白寡肽，用单室扩散池技术，研究并评价寡肽对离取罗非鱼鱼鳞经HC1脱钙后，酶解，得平均分子体鼠皮的透过性能，同时，通过计算胶原蛋白寡肽对量

6、为917．3Da的胶原蛋白寡肽，取cP适量，溶解于小鼠皮肤的累积渗透量、透皮速率，进而研究寡肽的0．9％NaCl溶液中，制成5me／mE溶液．离体透皮吸收性能．2．2凝胶柱色谱法测定分子量分布在色谱柱SuperdexPeptide10／300GL、柱温1材料、试剂与仪器25c【=、流速0．5mUmin、进样量50，以0．02M1．1材料与试剂phosphatebuffer，0．25MNaC1，pH值7．2为流动相的实验所用材料与试剂包括：罗非鱼干燥鱼鳞(海色谱条件下，于214rlIn波长处测定样品或标准品细南水产品市场)；胞

7、嘧啶核苷(Cytidine)(和光纯药工胞色素C(CytochromeC，Mw=12500Da，0．25mr：／业株式会社，LotTCH3764)，细胞色素C(CytochromemE)、维他命B12(VitaminB12，Mw=1355Da，0．025C)(和光纯药工业株式会社，LotPKN7103)，Vitaminme／mE)及胞嘧啶核苷(Cytidine，Mw=246Da，0．025B1：(和光纯药工业株式会社，LoLCl20o)，酪蛋白mr／mE)的保留时间，以各标准品峰的保留时间(rnin)收稿日期：2010—12

8、—18．作者简介：宋芹(1982一)，女，博士，讲师，从事天然产物研究与开发．第1期宋芹，等：一种胶原蛋白寡肽体外透皮吸收性能研究·9·为横坐标，分子量的对数(1ogMw)为纵坐标，绘制标准工作曲线，得线性回归方程，{Y：一0．0743x+5．6301，r=0．998同时，按下式计算平均分子量，盥譬盘ljl毒童～一盖三盐立～袁～Mw：∑Mw1×口l％+Mw2×{12％+Mw3×a3％+⋯+—，．jy上—Mw×0％O2●‘●1el‘l‘l●2口24‘2●8f,{(?tention1’lfj1cm式中，Mw为色谱图中第rz个峰的

9、分子量(Da)，／2n％图2罗非鱼鱼鳞胶原蛋白氮基酸色谱图(570nm)为色谱图中第n个峰占总峰面积的百分数(％)．胶原蛋白寡肽平均分子量约为920Da，10个氨基酸以下的寡肽约占50％，三肽约占12％．样品GPC色谱图如图1所示．荨至量§：晕0：宝々孽‘OIt2I●s‘T■，Iee{en