芽孢杆菌产β甘露聚糖酶的产酶条件及粗酶性质研究

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1、／形-·京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛-，论文集和作用，从而阻断病毒细菌的黏着。PIMP添加到肉鸡的饮水和饲料中，使GC数量和slgA数量及活性增强，说明PIMP对杯状细胞和肠道淋巴细胞的发育有一定的调节作用，本实验结果与一些资料的报道相一致。抗菌肽是一类广泛存在于生物体中的小分子多肽，具有广谱抗菌性，理化性质稳定，微生物不易对其产生抗药性，是生物体自身防御系统的一部分。由于其能抗革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌，抑杀多重耐药性菌株和肿瘤细胞，并且对病毒、原虫及癌细胞也有作用，近二十年来，

2、抗菌肽在医药、转基因应用、农业和畜牧业、食品和化妆品等领域均显示了广泛的应用前景。作为屠宰加工的副产物，猪小肠粘膜来源丰富，小肠粘膜抗菌肽的加工工艺简单易操作，提取的小肠粘膜抗菌肽物理性质稳定，不易变性分解，保存方便，有利于生产实践中的使用。抗菌肽成分为易消化吸收的氨基酸，可作为畜禽饲料添加剂取代或部分取代目前饲喂动物所用的抗生素，减少抗生素对动物体的危害。在肉鸡饮水和饲料中添加PIMP，能显著提高肠道的吸收作用和肠道粘膜的免疫作用，使营养物质吸收加强，天然免疫力增加，能够促进肉鸡的生长，缩短生长期，有望作为一种新

3、型的饲料添加剂应用于生产中。参考文献(略)芽孢杆菌产p一甘露聚糖酶的产酶条件及粗酶性质研究杨新建(北京农业职业学院北京102442)摘要：为确定芽孢杆菌WXY一100的最佳摇瓶培养工艺，采用了汐(弼)正交实验对培养基成分以及培养条件进行了优化。结果表明，最佳培养基成分为：酵母抽提物209／L，魔芋粉209／L，(Nil,)2SO。29／L，KIt2P04．『∥L，Mgso。·71-120lg／L。最佳培养条件为：种龄8—12h，接种量为6％，装液量为25mL，pHz5，培养温度们℃，培养时间25h。该酶在pH4—8

4、和6D℃以下稳定，作用最适条件是pH5．0和6D℃，CⅡn和C∥+对酶有较显著的激活作用，而n92+对酶有强烈的抑制作用。关键词：口一甘露聚糖酶；芽孢杆菌；产酶条件；性质有研究表明，B一甘露聚糖酶能有效分解存在于魔芋粉、槐豆胶、沙蒿胶、瓜儿豆胶等不同植物中的甘露聚糖以及葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖，主要产物为甘露低聚糖，而甘露低聚糖为功能糖类，有利于肠道双歧杆菌、乳酸菌的生长，抑制有害菌繁殖，从而改善肠道功能，增强免疫力【1’2J，同时甘露低聚糖还用于食品的加工贮藏、果汁的澄清[3】、纸浆的漂白[4]、植物胶质的降解

5、以及低温油井破胶[5】。本实验以提高B一甘露聚糖酶活力为目的，对影响酶活力的参数进行了正交设计，得到了最佳产酶培养基以及培养条件，并对该酶的部分性质做了研究，为进一步的研究工作打下了基础。1材料与方法1．1菌种芽孢杆菌WXY一100，由本室保藏。1．2种子培养基～级种子培养基：NaCI109／L，Yeastextract59／L，Trypetone109／L，pH7．2，高压灭菌后备用。接“京津冀畜牧兽医科技创新交流会暨新思想、新观点、新方法论坛，，论文集／缈种单个芽孢杆菌菌落，37℃振摇培养(200r／min)8

6、—12h，为一级种子。二级种子培养基：酵母抽提物109／L、魔芋粉7．59／L、(NH4)2SO。19／L、KH2P040．59／L、MgS04·7H200．59／L，pH7．5。按照5％的接种量接入一级种子，37。C振摇培养(200r／min)8—12h，为二级种子。1．3发酵培养基酵母抽提物209／L、魔芋粉209／L、(NH4)2S0429／L、KH2P04lg／L、MgS04·7H20lg／L，pH7．5。1．4发酵条件：250mL三角瓶装25mL发酵培养基，接人6％的二级种子，40％摇床培养25h(200

7、r／min)。发酵液于80009／min条件下离心20min，上清即为粗酶液。1．5酶活力测定取0．5％槐豆角(Sigma产品，50mmol／LTris—CI，pH7．5配制)溶液0．5mL加入反应管中，然后加入适当稀释的粗酶液0．1mL(6支平行管，其中2个在沸水浴之前加入酶液，作为0点，另外4支作为45rain的反应，记为45点)，40。C水浴反应45min后，加入1．5mL的DNS反应试剂，沸水浴5min，冷至室温后离心，测定550nm吸光值。在由标准甘露单糖溶液制定的标准曲线上将相应的吸光值(A45，Ao)

8、转换成糖浓度(M45，M0)，根据每升百万活性单位的发酵液45min反应后，产生的还原糖相当于5．49／L的甘露单糖标准，运用公式：酶活性=(M45一M0)÷5．4×稀释倍数×密度×103(单位mL)，计算出粗酶液的活性大小。1．6培养条件的优化1．6．1碳源对产酶的影响改变发酵培养基的碳源的种类与浓度(木糖、葡萄糖、果糖、甘露糖、甘油、乳糖、0．5％魔芋粉