蜂蜜酒发酵菌株选育研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com篁l1期蜜蜂杂志(月刊)JOURNALOFBEE(M。nthly)6蜜鳍怨迤奇王淼(云南农业大学东方蜜蜂研究所，云南昆明650201)摘要：通过对腐烂葡萄和发酵野坝子蜂蜜的酵母菌进行固体培养基：5Be。麦芽汁按2％添加琼脂，自然选育、诱变育种和耐酒精发酵试验，选育出一株稳定的酵121℃灭菌21)min。母菌A15，其最高酒精度达到1O．4茗(＼∥v)。1．3仪器设备关键词：自然分离；诱变育种；耐酒精发酵超净工作台，显微镜，湿热灭菌锅，磁力搅拌中图分类号：$896．1文献标识码：A器，1

2、5W紫外灯，杜氏管，离心机。文章编号：1003—9139(2006)11-0006—022方法Study0nScreening0fMead2．1酵母菌的纯化及第一轮筛选t1nI。erment』an』■0n⋯traln将从葡萄园腐烂葡萄和发酵野坝子蜜中各分离出的3株酵母菌A和B在固体培养基平板上划线分离，WANGMiao28℃恒温培养48h后，A1，B1各挑选30个直径p／scer伽ResearchInstituteofYAU，Kunming650201．1～2mm菌落，斜面培养保藏，同时接种加杜氏管液China)体培养基H进行发酵度

3、i贝0定(A1，B1的1表示传代数Abstract：Thispaperstudiedtheyeastinrottengrape第1代，依次类推)。andbarmyhoneyofElsholtziarUgl,losctbynaturalselection．UVmutationandethano1tolerancefermentat1On．the2．2酵母菌第二轮筛选及纯化mutantA15yieldedalcoho1atahigh1eve1of1O．4％第一轮筛选中发酵度高的酵母菌各3株进行第二(V／V)．andshowedstron

4、ggeneticstabilityduringthe次划线分离，再经28℃恒温培养48h后，A2，B2generation．各挑选30个直径相同的菌落，斜面培养保藏同时接Keywords：natura1selection；UVmutation；ethano1种加杜氏管液体培养基II进行发酵度测定。将发酵度高的酵母菌A2，B2两次划线分离，得tolerancefermentat1OnA3或B3，A4或B4斜面保藏，发酵度测定，将稳定蜂蜜酒酿造历史悠久。传统的酿造方法沿用至菌株连续两次传代得A5或B5，A6或B6，再进行发今，其法从自然

5、发酵到加曲酿造。虽然酿造工艺简酵度测定。并进行250mL瓶发酵试验。单，但质量不稳定，或终产品酒精度过低，残糖过2．3诱变与分离高，或发酵期间染杂菌产酸，这些问题都与蜂蜜酒发A6或B6稳定纯种接种在液体培养基I中，28酵菌种的质量有密切关系。因此，作为发酵菌种，尤培养，每4h振荡1次，离心，无菌生理盐水洗涤3其是工业化生产所用菌种选育就十分重要。次。收集10g湿菌体A7或B7，加90mL无菌水充蜂蜜酒是蜂蜜稀释后经发酵酿制而成的低酒精度分振荡，取5mL放入磁力搅拌器，15W紫外灯饮料I】J。本文探讨蜂蜜酒发酵菌株的分离选育思路，30

6、cm照射45s，取0．1mL涂布3个平板。A8或为获得优良菌株提供必要条件。B8挑选30个菌落进行复筛，保藏A9或B9及1材料250mL瓶发酵测定。1．1菌种2．4第三轮筛选A：从葡萄园腐烂葡萄中分离出3株酵母菌。将发酵度最高的1株菌，接种在液体培养基ⅢB：从发酵野坝子蜂蜜中分离出3株酵母菌。中。逐级浓度进行耐酒精发酵。每一次32h进行离1．2培养基心分离，进入下一级。最终得到A15或B15。进行液体培养基I：5Beo麦芽汁。250mL瓶发酵试验，并测定酒精度。液体培养基H：30oBX苕子蜜汁。3结果液体培养基Ⅲ：30oBX苕子蜜汁

7、按体积比添加3．1第一轮筛选结果2％，4％，6％，8％，10％，12％的99．57％酒精。A中1～30个菌落，有6株菌发酵度在“++++”收稿日期：2006—09—05以上。从中挑选出A1—3，A1—10，A1—27三株。B中基金项目：云南农业大学试验开发基金维普资讯http://www.cqvip.com7蜜蜂杂志(月刊)JOURNALOFBEE(Monthly)NO．112006Nov31～30个菌落，有4株发酵度“++++”以上，从中挑选长过快也容易老化，发酵周期长造成菌体自溶，影6响B1—7，B1—10，B1—20三三株。生

8、产。∞(2)菌落小和菌落大且发酵度高的酵母菌，通1，表1第一轮筛选结果“+”表示发酵度强弱过复筛后，发酵度降低，说明菌株不稳定，不0适应A1A1—3A1—1OA1—17A1—18A1—23A1—27生产。伯直径／mm1．61．31．8