毕业设计（论文）：黄河鲤铜蓝蛋白基因片段的克隆及序列分析

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1、河南农业大学牧医工程学院生物工程专业2013届毕业论文黄河鲤铜蓝蛋白基因片段的克隆及序列分析赵朋（2013届生物工程专业1班）摘要：为探讨黄河鲤铜蓝蛋白基因序列的特点，应用PCR技术和同源分析方法研究铜蓝蛋白核酸序列在不同动物体内的存在情况。结果：黄河鲤铜蓝蛋白的核酸序列与鲫鱼（Carassiusauratus）的同源性最高，达到96%；与鳙鱼（Aristichthysnobilis）铜蓝蛋白核酸序列的同源性达到93%；与斑马鱼（Daniorerio）铜蓝蛋白核酸序列的同源性达到91%。与其他物

2、种相比，不同种属间铜蓝蛋白核酸序列的同源性很低。以上结果表明，铜蓝蛋白基因在不同物种间存在一定甚至是较大差异，在同一种属中同源性则较高。关键词：黄河鲤；铜蓝蛋白；PCR；同源性CloneandSequenceAnalysisofpartgeneofCeruloplasmininCyprinusCarpioZhaoPeng(Class1ofBioengineering,Graduatedin2013)Abstract:CloneandSequenceAnalysisofpartgeneofCeru

3、loplasmininCyprinusCarpiowasstudiedbyusingPCRtechniquesandisogenyanalysismethod.TheresultsshowedthattheclonedpartgenesequenceofCeruloplasminmakesthehighesthomologywithCarassiusauratus,reached96%;Aristichthysnobilis(Aristichthysnobilis)reached93%,andt

4、hezebrafish(Daniorerio)reached91%.Comparedwithotherspecies,ifoundthatthehomologyofCeruloplasminnucleicacidsequenceislow.ItshowsthatCeruloplasmingenemusthavegreatdifferencesbetweenspecies,butthehomologyishigherinthesamespecies.Keywords:Cyprinuscarpio；

5、Ceruloplasmin；PCR；Homology铜蓝蛋白(EC1．16．3．)是Holmberg和Laurell于1948年从人血清a2球蛋白中纯化出的一种蛋白质，因其具有氧化酶活性，且外观呈蓝色[1]，故将之命名为铜蓝蛋白(CeruloplasminorCaeruloplasmin，CP)，同年他们又在猪血清中发现了CP[1]。之后的许多人分别在蛙、犬、小鼠、鸡、鹅、牛、骆驼、兔等几乎所有有常见家畜禽机体中发现了CP的存在，而植物中含有的是与CP结构、性质及功能相似的其他多铜氧化酶家族的成

6、员，且广泛存在。因此CP是广泛分布于各种动物机体中的一种含铜蛋白质。11河南农业大学牧医工程学院生物工程专业2013届毕业论文CP主要合成于肝脏，先在肝细胞内合成铜蓝蛋白前体蛋白，当前体蛋白到达肝细胞分泌区时，即渗入铜原子到前体蛋白中形成全铜蓝蛋白，随后被分泌出肝细胞。CP进入到组织间液中可发挥氧化酶作用[2-3]，并参与生物体内铜的转运[4]；通过其亚铁氧化酶作用调节机体内细胞铁的代谢[5-8]；参与机体抗氧化[9]；参与某些生物(斑马鱼)肝脏的发育过程[10]，也在胚胎发育过程中发挥重要作用

7、[11-12]；参与神经系统的发育及新生毛细血管的形成等[13-14]；是机体急性反应期的反应蛋白[15-16]，是各种炎症、感染、中毒及肿瘤疾病的标志性蛋白[17-19]；因CP与微量元素铜之间的特殊关系，它还是机体内铜营养状况的指示蛋白[21-21]，它还为母畜及妇女妊娠期、胎儿初生后为胎儿提供高效的生物铜源，并发挥营养作用[22-24]；与人类wilson病、阿尔茨梅病、帕金森病、遗传性低CP血症、神经变性综合症、肿瘤及癌症等多种疾病有密切的联系[25-26]。因此，长期以来不少的研究工作

8、者从CP蛋白的结构、生化特性、生物合成、在体内的分布、代谢及生理功能等诸多方面展开了大量研究，尤以该蛋白与人类部分疾病之间的联系研究较多，并取得了不少的成就。在鱼类铜蓝蛋白基因序列的研究目前主要集中在斑马鱼、鲫鱼和鳙鱼，并获得了部分的铜蓝蛋白核酸序列。目前还未见黄河鲤铜蓝蛋白核酸序列的报道，因此，本试验对黄河鲤铜蓝蛋白核酸序列进行克隆和序列分析，为进一步研究铜蓝蛋白的结构和功能奠定基础。1试验材料1.1试验动物黄河鲤取自黄河鱼场，体长(13.46±2.93)cm，体重(75.89±6.25)g左