正交设计法优选老鹰茶总皂苷的提取工艺研究

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1、正交设计法优选老鹰茶总皂苷的提取工艺研究作者：陆维丽李俊周维晨程文明汤文建【摘要】　　目的对从老鹰茶中提取总皂苷的工艺进行优化。方法以齐墩果酸为对照品，香草醛-高氯酸法显色，用紫外分光光度法在550nm处测定总皂苷含量。采用L9正交设计，以老鹰茶总皂苷含量为考察指标，考察乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数4个因素对提取的影响。结果最佳提取工艺为80%乙醇，12倍量，回流提取3次，1h/次。结论该工艺经实验重复性好，对进一步的工艺开发有较好的参考价值。【关键词】老鹰茶总皂苷正交实验紫外分光光度法老鹰茶系樟科木姜子属毛豺皮樟LitseacoreanaLev

2、e的叶，俗称“白茶”，分布于云南、贵州、四川、安徽等地。民间饮用表明老鹰茶具有解毒消肿、明目益思、生津止渴、解表防暑等功效，且无毒副作用，为药食同源植物［1］，长期饮用有益于健康。老鹰茶中含有黄酮、皂苷、有机酸、香豆素和鞣质等成分，其中皂苷类成分含量丰富［2］。研究老鹰茶的化学成分，对研究天然产物化学多样性，以及寻找新的药用成分具有重要意义。为了有效开发和利用资源，本文采用正交实验对老鹰茶总皂苷的提取工艺进行了研究。1仪器与试药仪器722S分光光度计；8453紫外-可见分光光度计(Agilent)；电子天平BP211D(Sartorius)；GSY-8电热

3、恒温水浴锅；EK-S5AB电热真空干燥箱。试药齐墩果酸标准品，购自中国药品生物制品检定所；老鹰茶，XX-05购自安徽省宁国县茶农，阴干备用，经植物学鉴定为樟科木姜子属毛豺皮樟LitseacoreanaLeve的叶。试剂均为分析纯，水为双蒸馏水。方法与结果.1标准曲线的制作［3］精密称取经120℃干燥至恒重的齐墩果酸标准品mg，置于2ml容量瓶中，甲醇定容，摇匀，即得对照品溶液(每毫升含齐墩果酸标准品)。精密量取对照品溶液，，，，，ml于10ml试管中，抽干甲醇，加%香草醛，高氯酸，摇匀于60℃水浴中加热1min，冷却，加冰醋酸ml，摇匀。以相应试剂做空白，

4、在8453紫外-可见分光光度计上进行全波长扫描，最大吸收波长为550nm。按分光光度法在550nm波长处测定吸光度。以吸光度值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为横坐标绘图，得回归线性方程Y=，r=，线性范围：～·L-1。.2提取溶剂的选择.水提取法精密称取老鹰茶g，加水50ml，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取2次，洗涤残渣，合并滤液和洗涤液，蒸干溶剂。固体水溶后，正丁醇萃取，萃取液过氧化铝柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，摇匀，待用。.乙醇提取法精密称取老鹰茶g，加80%乙醇50ml，在水浴上加热回流提取1h，趁热过滤，共提取2次，洗涤

5、残渣，合并滤液和洗涤液，蒸干溶剂。固体水溶后，正丁醇萃取，萃取液过氧化铝柱，收集流出液，定容至200ml容量瓶中，摇匀，待用。.样品中总皂苷的含量测定精密量取供试品溶液，按标准曲线方法进行操作，测定吸光度值，由回归方程计算样品中总皂苷的含量。结果见表1。表1提取溶剂与含量的关系.3正交实验设计与结果根据药材性质和生产实际要求，拟定影响浸出效果的4个主要因素，即A为乙醇浓度(%)，B为乙醇用量(倍体积)，C为提取时间(h/次），D为提取次数，每个因素选择3个水平，编制因素水平表见表2。表2因素水平称取适量老鹰茶干燥粗粉9份，按正交实验设计的工艺进行提取，以老

6、鹰茶提取物中总皂苷含量为考核指标，对正交实验结果进行方差分析见表3～4。表3正交试验(L934)直观分析表4方差分析根据分析结果可知，各个因素对老鹰茶总皂苷提取效果的影响程度依次为A>D>C>B，且对提取效果影响有统计学意义的因素是因素A。综合直观分析和方差分析的结果，老鹰茶总皂苷理想的提取工艺方案是A3B3C1D3，即用12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。.4提取工艺的验证实验为进一步考察上述最佳工艺的稳定性和合理性，按该工艺条件进行重复性实验3次，分别测定老鹰茶总皂苷的含量。结果见表5。测定的结果均等于或优于正交实验表中的任何一组，重复性好，

7、RSD=%(n=3)。说明该工艺稳定可行。表5最佳工艺的验证实验讨论　　香草醛-高氯酸法显色体系最大吸收波长在550nm处，该显色体系呈色稳定，但由于老鹰茶粗提物中有色物质的干扰，粗提物须经过氧化铝脱色。样品脱色后显色在近550nm处有最大吸收，因此该显色体系可用于老鹰茶总皂苷含量测定。　　由正交实验的直观分析和方差分析结果可知，从总皂苷这一指标来看，因素A的影响最大，差异性最为显著；老鹰茶总皂苷的最佳提取工艺为12倍量的80%乙醇，回流提取3次，1h/次。本实验优选出的工艺简单，操作容易，稳定性好。【参考文献】　　［1］李延松.老鹰茶资源调查与开发利用［

8、J］.贵州茶叶,1995,4:10.　　［2］郁建平,古练权.贵州